淺表播散型汗孔角化癥致病基因的定位克隆.pdf

1、目的對已定位的淺表播撒型汗孔角化癥致病區(qū)段的候選基因進行大規(guī)模突變篩查及突變分析，以識別該病的致病基因，進一步闡明汗孔角化癥的發(fā)病機制。 方法抽提家系成員的外周血基因組DNA和正常人皮膚組織RNA。利用已知的網(wǎng)上資源對候選區(qū)域內(nèi)的基因進行搜索，然后利用皮膚組織RNA對候選基因進行RT-PCR，確定在皮膚中表達(dá)的基因，根據(jù)基因組序列設(shè)計PCR引物，用家系樣本的DNA做模板，進行PCR擴增，然后用SAP、ExonⅠ純化PCR產(chǎn)物。用

2、BigDyeTerminator測序試劑盒進行測序反應(yīng)，采用3700DNA自動測序儀測序，再采用生物信息學(xué)方法處理測序結(jié)果，尋找突變位點，識別致病基因。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記物D12s1671-D12s1605之間的24個基因在皮膚中表達(dá)。共篩查了這一區(qū)段包括SSH1、SART3基因在內(nèi)的60個基因，一共736個外顯子，發(fā)現(xiàn)了203個SNPs，其中有3個與家系4高度連鎖，即：KIAA0701E20外顯子161bp處T/G雜合；FLJ1

3、0620E8外顯子上游108bp處GG的雜合缺失；FLJ34221E25外顯子22bp處G/A雜合。 結(jié)論發(fā)現(xiàn)了與家系4高度連鎖的3個SNPs，排除了60個候選基因是汗孔角化癥致病基因的可能性。 意義本研究發(fā)現(xiàn)了與家系4高度連鎖的3個SNPs更加支持了我們將DSP致病基因定位于染色體12q23.1-24.2的準(zhǔn)確性。同時排除了這一區(qū)域中60個候選基因是汗孔角化癥致病基因的可能性，為以后汗孔角化癥致病基因的研究節(jié)省了大量的