應用外顯子組測序鑒定一個汗孔角化癥家系的致病基因.pdf

1、汗孔角化癥(porokeratosis，PK)是一種特殊的皮膚角化異常，最早在1893年由Mibelli報道。該病的皮損為環(huán)形或不規(guī)則形的斑片，邊緣清晰且呈堤狀隆起，中央部分平滑干燥，輕度萎縮。皮損呈褐色或淺褐色，多出現(xiàn)在四肢、面部、頸部等處，口腔粘膜甚至角膜也可累及。汗孔角化病分為4-6種亞型，彌漫性淺表性光敏性汗孔角化癥(disseminated superficial actinic porokeratosis, DSAP)是一種

2、相對常見的PK亞型，一般在10歲以后發(fā)病，該亞型的皮損較小、淺表性、成簇狀，主要累及曝光部位。紫外線照射、免疫抑制和炎癥等因素均有可能加重或誘發(fā)DSAP病情。
　　 汗孔角化癥的病因至今未知，作為一種外顯不全并具有遺傳異質性的顯性遺傳病，目前已經定位了四個DSAP致病基因位點:12q23.2-24.1，15q25.1-26.1，1p31.3-31.1和16q24.1-24.3。人們對位于這些區(qū)間的多個基因，如CRY1，C4ST1

3、，TXNRD1，HCF2進行了突變篩查，但至今未發(fā)現(xiàn)DSAP的致病基因。
　　 本研究的對象是三個DSAP家系（簡稱為家系1、家系2和家系3），家系1和家系3均來自湖南，家系2來自安徽淮南，我室曾通過全基因組掃描和連鎖分析的方法對家系1和家系2進行了研究，并將DSAP1位點定位在D12S338至D12S1605之間4.4cM的區(qū)間;同時，我們采用候選克隆技術對定位于該區(qū)間的CRY1、C4ST1、TXNRD1、HCF2、CMKLR

4、1和KIAA0789基因進行突變篩查，但均未發(fā)現(xiàn)與DSAP共分離。2009年來，外顯子捕獲和新一代測序技術為單基因病致病基因的克隆提供了新的策略。此次研究中，我們在家系1中選取兩個患者和一個非患者，應用外顯子組測序的方法分析他們所有外顯子序列，結合我們以前對該家系連鎖分析的結果，尋找DSAP的致病基因。然后我們運用Sanger測序法在三個家系中分別驗證外顯子組測序的實驗結果，以期發(fā)現(xiàn)DSAP致病基因。
　　 外顯子組測序結果顯示

5、，家系1兩名患者的MVK基因存在c.566C＞T的突變，該突變導致第189位氨基酸ALA＞VAL的改變。為了驗證我們的發(fā)現(xiàn)，又通過Sanger測序法在家系1、家系2和家系3中對MVK基因進行了突變篩查，發(fā)現(xiàn)MVK基因在3個家系的所有患者中均存在突變:家系1中突變結果與外顯子組測序結果一致，家系2中存在c.1039+2T＞C改變，家系3中存在突變c.935A＞G。所有的這些突變在家系非患者中均未出現(xiàn)，提示MVK基因是DSAP的致病基因。<