過氧化物酶體增殖物活化受體γ在哮喘氣道炎癥和重建中的作用.pdf

1、支氣管哮喘(下稱哮喘)是一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病病，全球發(fā)病率逐年增高。慢性氣道炎癥和氣道重建是哮喘主要特征，研究表明二者相互影響互為因果，共同導致氣道的高反應性和呼吸道癥狀。深入探討氣道炎癥和重建的機制對于發(fā)現新的、有效的哮喘治療方法具有重要意義。近幾年的研究發(fā)現，過氧化物酶體增殖物活化受體丫(peroxisomeProliferator-activatedreceptorγ，PPAR7)參與多種疾病的炎癥和重建過程，具有廣泛的抗炎、抗

2、重建作用；但對PPAR7在哮喘氣道炎癥和重建中的作用尚缺乏統(tǒng)一的認識。本課題從體內、體外兩方面，研究PPAR7參與哮喘氣道炎癥和重建的機制。 第一部分PPAR7在慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建中的作用 第一節(jié)：慢性哮喘小鼠模型的建立及PPAR7的表達 目的：觀察慢性小鼠氣道炎癥和重建的表現，明確PPAR7的表達和組織學定位。方法：以卵白蛋白(ovalbumin，OVA)致敏并激發(fā)的方法建立小鼠慢性哮喘模型。檢測BAL

3、F中細胞數和IL．．4水平，病理切片觀察小鼠肺內炎癥細胞情況、氣道管壁及平滑肌厚度、粘膜血管新生和血管管壁厚度，以及氣道旁和血管旁膠原纖維沉積情況。測定肺組織羥脯氨酸含量和對腺苷、乙酰膽堿的反應性。免疫組化方法檢查PPAR7表達的組織學定位。結果：哮喘組小鼠煩躁不安、呼吸急促、腹肌痙攣；BALF中自細胞總數、嗜酸細胞及淋巴細胞均較對照組顯著升高；氣道上皮損傷、杯狀細胞增生明顯，粘液分泌增加；支氣管周圍大量炎癥細胞聚集；氣道旁和血管旁膠原

4、纖維增生；氣道平滑肌層和血管壁增厚。氣道對腺苷、乙酰膽堿的反應性增高。在哮喘小鼠的氣道上皮細胞、平滑肌細胞和炎癥細胞中有明顯的PPARy表達。結論：OVA致敏并霧化激發(fā)能建立具有廣泛炎癥和重建表現的慢性哮喘小鼠模型。在哮喘肺組織內有明顯的PPAR?表達，組織學上主要集中在氣道上皮細胞、平滑肌細胞和炎癥細胞。 第二節(jié)PPAR7調節(jié)劑對慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建的影響。 目的：探討PPAR7調節(jié)劑對慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建

5、中的作用及其機制。方法：以PPAR7激動劑和拮抗劑分別霧化處理哮喘小鼠，觀察小鼠的病理學變化、炎癥因子和PPAR7的表達。結果：PPAR~激動劑治療后小鼠BALF中炎癥細胞和l-4水平，氣道和肺組織的炎癥和重建程度減輕(P<0．01)。westernblot檢查發(fā)現肺組織核蛋白中PPAR7的表達增加2．7倍，而TGF61和eotaxin的轉錄下降65％和50％，與核內PPAR?成負相關(r=-0．895、0．954)、。結論：PPAR7

6、激動劑能通過提高核內PPAR7水平，改善慢性哮喘小鼠的氣道炎癥和重建。 第二部分PPAR7在氣道上皮細胞中的作用及其機制 第一節(jié)人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)和PPAR7的表達。 目的：建立人支氣管上皮細胞(humanbronchialepithelialcells，hBECs)原代培養(yǎng)的方法，并觀察PPARy的表達。方法：解剖手術切除的人支氣管標本，以植塊法體外培養(yǎng)hBECs。以TGFBl和IL-4聯合刺激hBEC

7、s，并以RT-PCR方法測定eotaxin和Fibronectinl(FNl)，免疫熒光法確定hBEC中PPAR7的表達。結果：應用植塊法成功培養(yǎng)原代hBECs，每lcm葉支氣管可獲得hBECs6-7×106。RT-PCR結果顯示hBECs經TGFBl和IL-4刺激激6h后，eotaxin和FNl的轉錄分別較刺激前增強10倍和5．7倍(P<0．01)。免疫熒光結果顯示，經TGFBl和IL-4刺激的hBECs胞漿內有PPAR7的表達。結論

8、：經TGFBl和IL-4處理的hBECs能模擬在哮喘的體內狀態(tài)，eotaxin和FNl轉錄增加，胞漿內有PPARy的表達。第二節(jié)PPAR7激動劑對氣道上皮細胞功能的調控及其機制。目的：探討PPAR7激動劑調控氣道上皮細胞功能的機制。方法：在不同時間點、以不同劑量的羅格列酮干預hBECs，westemblot檢測PPARy和GRa的表達：以RT-PCR方法測定羅格列酮和布地奈德對eotaxin和FNl轉錄的影響。結果：羅格列酮以劑量相關方

9、式促進PPARy和GRa向核內的轉移(P<0．01)，但與干預時間無關。羅格列酮和布地奈德均以劑量相關方式抑制細胞eotaxin和FNl的轉錄，且二者聯合使用的作用高于單一用藥(P<0．01)。結論：PPARy激動劑通過促進PPAR7和GRa的核轉位，抑制炎癥和纖維化相關基因的轉錄。 課題主要結論： 1．PPAR7參與慢性哮喘中的抗炎癥和抗重建過程。 2．PPARy激動劑以劑量依賴的方式持續(xù)增強PPAR7的核轉位