過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體δ（PPARδ）在大腸癌發(fā)生中的作用研究.pdf

1、第一部分人直腸癌組織中PPARδ的表達(dá)及意義--附86例臨床分析 目的：探討PPAR δ基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞增殖活力及凋亡機(jī)能的影響。 方法：構(gòu)建4條表達(dá)短發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(short-hairpin RNA，shRNA)的質(zhì)粒載體，其中3條為靶向PPAR δ基因的候選載體(pS-shRNA-1，-2，-3)，1條為不靶向任何編碼序列的陰性干擾載體(pS-shRNA-N)。將人大腸癌細(xì)胞株HCT-116分為4個(gè)組：①．干擾組：

2、分別用pS-shRNA-1，-2，-3轉(zhuǎn)染細(xì)胞；②．陰性干擾組：用pS-shRNA-N轉(zhuǎn)染細(xì)胞；③．空白質(zhì)粒組：用空白pSUPER質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞：④．對(duì)照組：HCT-116細(xì)胞和其它組在相同條件下培養(yǎng)，但不轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。用脂質(zhì)體2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染，48h后，應(yīng)用Feal-time RT-PCR分析PPARδ基因表達(dá)，篩選出強(qiáng)效表達(dá)載體。采用噻唑藍(lán)(MTT)比色實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)及原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)觀察PPAR δ基因沉默對(duì)大腸癌細(xì)胞

3、增生、細(xì)胞周期及凋亡的影響。 結(jié)果：pS-shRNA-1質(zhì)粒能顯著抑制HCT-116細(xì)胞中PPAR δ的表達(dá)，使PPARδ mRNA水平下調(diào)73.5％(P=0.012)。MTT試驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)染后24-96h，對(duì)照組、pS-shRNA-N及空白質(zhì)粒組的光吸收值在各時(shí)點(diǎn)均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而pS-shRNA-1干擾組在各時(shí)點(diǎn)的光吸收值均顯著高于前三組細(xì)胞(P<0.05)。轉(zhuǎn)染后48h，干擾組的G<,1>期細(xì)胞分布比對(duì)照組顯

4、著降低(26.8％VS 38.6％，P=0.037)，而對(duì)照組、pS-shRNA-N及空白質(zhì)粒組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，各組在S期與G<,2>/M期的細(xì)胞分布比例(S期：G<,2>/M期)無(wú)顯著差異(P=0.782)。轉(zhuǎn)染后48h，pS-shRNA-1干擾組、pS-shRNA-N組、空白質(zhì)粒組及對(duì)照組的細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為3.76±1.81％、3.98±2.0％、4.0±1.64％、4.70±1.93％，各組間無(wú)顯著性差異(P=0

5、.726)。 結(jié)論：PPAR δ基因可增加G<,1>期的大腸癌細(xì)胞分布，并抑制細(xì)胞增殖，PPARδ對(duì)大腸癌細(xì)胞的凋亡無(wú)影響。 第二部分 應(yīng)用RNA干擾技術(shù)研究PPARδ基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞增生及凋亡的影響 目的：分析人直腸癌組織中PPAR δ基因的表達(dá)變化及其與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系。 方法：選取2004年4-10月四川大學(xué)華西醫(yī)院普外科手術(shù)切除的直腸癌標(biāo)本86例，以正常直腸粘膜為對(duì)照，采用real-tim

6、e RT-PCR對(duì)PPAR δ mRNA作定量檢測(cè)，并分析其表達(dá)與直腸癌分化程度、病理類型及Dukes分期的關(guān)系。 結(jié)果：在86例直腸癌組織中，PPAR δ表達(dá)上調(diào)占55.8％(48/86)，其中，45.3％(39/86)上調(diào)1.5-5倍，5.8％(5/86)上調(diào)10-20倍，4.7％(4/86)大于20倍，PPAR δ表達(dá)下調(diào)占44.2％(38/86)，下調(diào)1.5-2.0倍。直腸癌組織中PPAR δ的總體表達(dá)水平比正常粘膜組平