加壓毛細管電色譜二維聯(lián)用技術的研究及其在復雜體系分離中的應用.pdf

1、加壓毛細管電色譜（pCEC）以壓力流結(jié)合電滲流為驅(qū)動力，克服了電色譜本身不能定量進樣、焦耳熱明顯和易產(chǎn)生氣泡等缺點，同時可提供梯度洗脫，有利于復雜樣品的分離分析。近年來，由于各種組學的出現(xiàn)，對分析技術提出了更大的挑戰(zhàn)。兩維聯(lián)用技術結(jié)合兩種不同分離機理的分析模式，可以有效地提高系統(tǒng)的峰容量和分辨率，為復雜樣品的分析提供了更好的分離手段。加壓毛細管電色譜對帶電物質(zhì)本身就兼具毛細管電泳和高效液相色譜的雙重機理，進一步發(fā)展加壓毛細管電色譜技術的

2、二維聯(lián)用，將提供一種基于三重分離機理基礎上的分析平臺，具有更好的選擇性和更大峰容量，應用領域十分廣闊。本論文將建立基于加壓毛細管電色譜的二維聯(lián)用技術，并用于中藥、生物樣品等復雜樣品的分離分析，取得了較好的結(jié)果。
　　本論文共分為六章，主要包括：
　　第一章介紹了選題背景和意義。主要介紹了毛細管電色譜和加壓毛細管電色譜的基本原理和色譜柱技術，并描述了二維色譜聯(lián)用技術的特點和研究進展，在此基礎上闡述了發(fā)展加壓毛細管電色譜二維聯(lián)用

3、技術的優(yōu)勢。
　　第二章將加壓毛細管電色譜用于中藥黃柏提取液的分離分析。通過對提取溶劑、流動相組成、檢測波長、施加電壓等條件的優(yōu)化，建立了中藥黃柏提取液的加壓毛細管電色譜分析方法。其中著重討論了電壓對黃柏分離的影響，并以藥根堿、小檗堿和巴馬汀等三種標準品為驗證對象，研究了pCEC的雙重選擇性。發(fā)現(xiàn)與通常的微徑液相相比，pCEC可調(diào)節(jié)參數(shù)多，對優(yōu)化復雜樣品的分離具有更多和更好的可能性，為其在二維聯(lián)用中發(fā)揮電壓對分離帶來的獨特優(yōu)勢提供

4、了方法基礎。
　　第三章構建了強陽離子交換-反相雙相整體柱加壓毛細管電色譜（Biphasic SCX-RP monolithicpCEC2D system）二維系統(tǒng)。為了實現(xiàn)二維聯(lián)用體系的簡單、方便和實用，在本實驗中將SCX和RP兩種填料通過整體柱技術合成在一根毛細管中，制成新型SCX-RP雙相整體柱，并將其應用于二維pCEC的體系，構建了雙相柱二維pCEC分離模式。嘗試利用NH4Cl鹽從SCX柱上進行四步洗脫，再用乙腈-水梯度對

5、RP柱進行洗脫，用于牛血清白蛋白（BSA）酶解液的分離。此技術的實現(xiàn)為二維技術的發(fā)展提供了新的思路。
　　第四章建立了強陽離子交換毛細管液相色譜和反相加壓毛細管電色譜(μ-SCXLC/RP-pCEC)二維聯(lián)用系統(tǒng)。通過對單維分析條件、二維體系流動相的匹配度、片段切割次數(shù)等條件進行了優(yōu)化，分別構建了離線和在線兩種μ-SCXLC/RP-pCEC二維聯(lián)用體系，并用于中藥、生物樣品等幾種復雜體系的分析。其中第一維SCX采用NH4Cl鹽-水

6、體系，離線模式采用線性梯度洗脫，在線模式采用臺階梯度洗脫；第二維pCEC采用乙腈-水體系，離線和在線模式均采用梯度洗脫。并通過理論深入研究了實驗構建的二維系統(tǒng)的正交性、峰容量等表征參數(shù)，發(fā)現(xiàn)從理論上可證明此二維體系正交程度較高，黃柏、BSA酶解液和人血清酶解液三種樣品分離的正交性均超過了75％，三種樣品離線體系的實際峰容量達到568、940和576，在線模式達到355、436和480，遠遠高于單維分離體系，證明構建的二維體系可以有效地提

7、高峰容量和分辨率。
　　第五章構建了兩種親水性液相色譜和反相加壓毛細管電色譜二維系統(tǒng)：氰基液相色譜-反相加壓毛細管電色譜（CN-LC/RP-pCEC）和氨基液相色譜-反相加壓毛細管電色譜（Amide-LC/RP-pCEC）。第一維親水色譜分別選用氰基和氨基兩種親水模式色譜柱，流動相采用甲醇-水體系；第二維采用反相C18色譜柱，流動相采用乙腈-水體系。利用三種色譜柱對不同極性物質(zhì)分離能力帶來的互補性和正交性，不同流動相帶來的選擇性，

8、通過離線收集濃縮的方法解決兩維流動相匹配問題的基礎上，構建了兩種離線CN-LC/RP-pCEC和Amide-LC/RP-pCEC二維聯(lián)用模式，并用于復雜樣品BSA酶解液和人血清酶解液的分離分析，峰容量達到了600-700。
　　第六章構建了反相加壓毛細管電色譜和反相液相色譜-離子阱質(zhì)譜（RP-pCEC/RP-LC-LTQ）二維分離系統(tǒng)?？紤]到多肽類物質(zhì)在不同pH值下在反相色譜上保留情況不同，第一維RP-pCEC采用堿性流動相，第二