加壓毛細(xì)管電色譜二維聯(lián)用技術(shù)的研究及其在復(fù)雜體系分離中的應(yīng)用.pdf

1、加壓毛細(xì)管電色譜（pCEC）以壓力流結(jié)合電滲流為驅(qū)動力，克服了電色譜本身不能定量進(jìn)樣、焦耳熱明顯和易產(chǎn)生氣泡等缺點(diǎn)，同時可提供梯度洗脫，有利于復(fù)雜樣品的分離分析。近年來，由于各種組學(xué)的出現(xiàn)，對分析技術(shù)提出了更大的挑戰(zhàn)。兩維聯(lián)用技術(shù)結(jié)合兩種不同分離機(jī)理的分析模式，可以有效地提高系統(tǒng)的峰容量和分辨率，為復(fù)雜樣品的分析提供了更好的分離手段。加壓毛細(xì)管電色譜對帶電物質(zhì)本身就兼具毛細(xì)管電泳和高效液相色譜的雙重機(jī)理，進(jìn)一步發(fā)展加壓毛細(xì)管電色譜技術(shù)的

2、二維聯(lián)用，將提供一種基于三重分離機(jī)理基礎(chǔ)上的分析平臺，具有更好的選擇性和更大峰容量，應(yīng)用領(lǐng)域十分廣闊。本論文將建立基于加壓毛細(xì)管電色譜的二維聯(lián)用技術(shù)，并用于中藥、生物樣品等復(fù)雜樣品的分離分析，取得了較好的結(jié)果。
　　本論文共分為六章，主要包括：
　　第一章介紹了選題背景和意義。主要介紹了毛細(xì)管電色譜和加壓毛細(xì)管電色譜的基本原理和色譜柱技術(shù)，并描述了二維色譜聯(lián)用技術(shù)的特點(diǎn)和研究進(jìn)展，在此基礎(chǔ)上闡述了發(fā)展加壓毛細(xì)管電色譜二維聯(lián)用

3、技術(shù)的優(yōu)勢。
　　第二章將加壓毛細(xì)管電色譜用于中藥黃柏提取液的分離分析。通過對提取溶劑、流動相組成、檢測波長、施加電壓等條件的優(yōu)化，建立了中藥黃柏提取液的加壓毛細(xì)管電色譜分析方法。其中著重討論了電壓對黃柏分離的影響，并以藥根堿、小檗堿和巴馬汀等三種標(biāo)準(zhǔn)品為驗(yàn)證對象，研究了pCEC的雙重選擇性。發(fā)現(xiàn)與通常的微徑液相相比，pCEC可調(diào)節(jié)參數(shù)多，對優(yōu)化復(fù)雜樣品的分離具有更多和更好的可能性，為其在二維聯(lián)用中發(fā)揮電壓對分離帶來的獨(dú)特優(yōu)勢提供

4、了方法基礎(chǔ)。
　　第三章構(gòu)建了強(qiáng)陽離子交換-反相雙相整體柱加壓毛細(xì)管電色譜（Biphasic SCX-RP monolithicpCEC2D system）二維系統(tǒng)。為了實(shí)現(xiàn)二維聯(lián)用體系的簡單、方便和實(shí)用，在本實(shí)驗(yàn)中將SCX和RP兩種填料通過整體柱技術(shù)合成在一根毛細(xì)管中，制成新型SCX-RP雙相整體柱，并將其應(yīng)用于二維pCEC的體系，構(gòu)建了雙相柱二維pCEC分離模式。嘗試?yán)肗H4Cl鹽從SCX柱上進(jìn)行四步洗脫，再用乙腈-水梯度對

5、RP柱進(jìn)行洗脫，用于牛血清白蛋白（BSA）酶解液的分離。此技術(shù)的實(shí)現(xiàn)為二維技術(shù)的發(fā)展提供了新的思路。
　　第四章建立了強(qiáng)陽離子交換毛細(xì)管液相色譜和反相加壓毛細(xì)管電色譜(μ-SCXLC/RP-pCEC)二維聯(lián)用系統(tǒng)。通過對單維分析條件、二維體系流動相的匹配度、片段切割次數(shù)等條件進(jìn)行了優(yōu)化，分別構(gòu)建了離線和在線兩種μ-SCXLC/RP-pCEC二維聯(lián)用體系，并用于中藥、生物樣品等幾種復(fù)雜體系的分析。其中第一維SCX采用NH4Cl鹽-水

6、體系，離線模式采用線性梯度洗脫，在線模式采用臺階梯度洗脫；第二維pCEC采用乙腈-水體系，離線和在線模式均采用梯度洗脫。并通過理論深入研究了實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的二維系統(tǒng)的正交性、峰容量等表征參數(shù)，發(fā)現(xiàn)從理論上可證明此二維體系正交程度較高，黃柏、BSA酶解液和人血清酶解液三種樣品分離的正交性均超過了75％，三種樣品離線體系的實(shí)際峰容量達(dá)到568、940和576，在線模式達(dá)到355、436和480，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于單維分離體系，證明構(gòu)建的二維體系可以有效地提

7、高峰容量和分辨率。
　　第五章構(gòu)建了兩種親水性液相色譜和反相加壓毛細(xì)管電色譜二維系統(tǒng)：氰基液相色譜-反相加壓毛細(xì)管電色譜（CN-LC/RP-pCEC）和氨基液相色譜-反相加壓毛細(xì)管電色譜（Amide-LC/RP-pCEC）。第一維親水色譜分別選用氰基和氨基兩種親水模式色譜柱，流動相采用甲醇-水體系；第二維采用反相C18色譜柱，流動相采用乙腈-水體系。利用三種色譜柱對不同極性物質(zhì)分離能力帶來的互補(bǔ)性和正交性，不同流動相帶來的選擇性，

8、通過離線收集濃縮的方法解決兩維流動相匹配問題的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了兩種離線CN-LC/RP-pCEC和Amide-LC/RP-pCEC二維聯(lián)用模式，并用于復(fù)雜樣品BSA酶解液和人血清酶解液的分離分析，峰容量達(dá)到了600-700。
　　第六章構(gòu)建了反相加壓毛細(xì)管電色譜和反相液相色譜-離子阱質(zhì)譜（RP-pCEC/RP-LC-LTQ）二維分離系統(tǒng)?？紤]到多肽類物質(zhì)在不同pH值下在反相色譜上保留情況不同，第一維RP-pCEC采用堿性流動相，第二