人參二醇促進再生障礙性貧血小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及調(diào)節(jié)免疫的作用.pdf

1、目的：
　　觀察自行提取分離的人參二醇對免疫介導(dǎo)型再生障礙性貧血（再障）小鼠的療效，促進再障小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（MSC）的增殖，及對T淋巴細胞亞群的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　?、偃撬栀N壁法培養(yǎng)骨髓MSC，觀察原代細胞和傳代細胞形態(tài)、增殖狀況，及形成成纖維祖細胞集落(CFU-F)的能力。
　?、诓捎贸晒羌毎?、脂肪細胞培養(yǎng)體系，誘導(dǎo)充質(zhì)干細胞向成骨細胞和成脂肪細胞分化，并分析骨髓MSC細胞免疫表型。
　

2、?、蹖SC與同種異體小鼠胸腺T淋巴細胞分別按1:25、1:50、1:100比例，共同培養(yǎng)7d，流式細胞術(shù)檢測各組CD4+、CD8+T淋巴細胞表達的變化。
　　④MTT法檢測不同濃度人參二醇5、10、25、50、100mg/L體外促進MSC增殖的作用。
　?、莶捎妹庖呓閷?dǎo)法建立Babl/c小鼠再障模型，治療分7組，正常組、模型組、人參二醇低、中、高劑量組，陽性對照復(fù)方皂礬丸和環(huán)胞菌素A組，均灌胃治療14d。
　?、拗委?/p>

3、后小鼠的一般情況，計數(shù)外周血白細胞、血小板，骨髓病理切片造血組織增生狀況。
　　⑦再障小鼠骨髓CFU-F集落生成的試驗，及人參二醇促進增殖的作用。人參二醇治療后各組小鼠骨髓細胞形成CFU-F集落的變化。
　?、嘀委熀蟾鹘M外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞比值的變化。
　　結(jié)果：
　?、倥囵B(yǎng)后MSC原代貼壁細胞形態(tài)不均一，可見梭形、圓形、三角形細胞。傳代細胞形態(tài)趨于均一，以梭形為主，CD44、CD29表達陽性，CD

4、45表達陰性；成骨培養(yǎng)體系誘導(dǎo)14d后茜素紅染色可見大量鈣化沉淀于胞外基質(zhì)，成脂培養(yǎng)體系誘導(dǎo)21d后油紅“O”染色可見大量橙紅色脂肪滴。
　?、贛SC與同種異體小鼠胸腺 T淋巴細胞共培養(yǎng)， CD4+、CD8+T淋巴細胞均明顯低與對照組，提示MSC對CD4+、CD8+T淋巴細胞有抑制。
　　③MTT測定顯示人參二醇體外具有促進MSC增殖的作用，且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。
　　④再障小鼠外周血的白細胞、血小板數(shù)量急劇下降，

5、骨髓病理切片造血細胞減少，造血組織被大量的脂肪組織代替，提示造模是成功的。
　?、萑藚⒍贾委?、10、14d，再障小鼠的外周血白細胞、血小板數(shù)均顯著高于模型組。
　?、拊僬夏Ｐ托∈蠊撬璧腃FU-F集落數(shù)明顯低于正常小鼠，而人參二醇各治療組的CFU-F集落數(shù)量均明顯高于模型組。
　?、咴僬闲∈篌w內(nèi)T淋巴細胞亞群比例失調(diào)，CD4+/CD8+細胞比例倒置。人參二醇各治療組能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細胞數(shù)，提高CD

6、4+細胞數(shù)，而恢復(fù)CD4+/CD8+細胞比值。
　　結(jié)論：
　　人參二醇不但在體外能夠有效地促進小鼠骨髓MSC增殖，而且對再障小鼠體內(nèi)病態(tài)造血狀態(tài)的MSC也同樣具有促進增殖作用，從而起到改善造血微環(huán)境的作用。人參二醇通過有效刺激骨髓粒系、紅系和巨核系三系造血祖細胞增殖，促進再障小鼠的血細胞生成，升高外周血白細胞和血小板數(shù)。免疫調(diào)節(jié)作用是能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細胞數(shù)，提高CD4+細胞數(shù)，而恢復(fù)CD4+/CD8+細