細菌脂多糖及激素對角膜Toll樣受體表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過研究細菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)對人角膜上皮細胞系(hunmancornealepithelialcellline，HCEC)和角膜基質(zhì)成纖維細胞(hunmancornealfibroblasts，HCF)Toll樣受體(toll-likereceptors，TLRs)的表達和功能的影響，以及糖皮質(zhì)激素對這種影響的調(diào)控，探討TLRs及糖皮質(zhì)激素在角膜細菌感染中的可能作用。 方法：首先通過R

2、T-PCR.及quantitativeReal-TimePCR檢測HCEC和HCF中TLRs在mRNA水平的表達；然后在兩種細胞的培養(yǎng)液中加入三種濃度的LPS(1，10，100ng/ml)共培養(yǎng)48小時，通過Real-TimePCR檢測此時兩種細胞TLRs的表達；以及在此基礎(chǔ)上，選擇在10ng/mlLPS刺激的兩種細胞的培養(yǎng)液中加入三種濃度的氫化可的松(1，10，100μg/ml)進行干預(yù)，并檢測此種情況下兩種細胞ILRs的表達。再用酶

3、聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linkedimmunosorbentassays，ELISA)來檢測以上三種情況下兩種細胞培養(yǎng)液中IL-6、IL-8的釋放。并且通過免疫熒光組化來檢測TLR2、TLR4在蛋白水平的表達。 結(jié)果：TLRL-10mRNA在HCEC和HCF均有表達，且表達量各不相同。LPS能增加兩種細胞TLRsmRNA的表達，以TLR2、4mRNA增加最明顯，且當(dāng)LPS為10ng/ml時TLRs的表達量最高，同時IL-

4、6、IL-8的釋放也相應(yīng)增高。在10ng/mlLPS刺激的HCEC和HCF培養(yǎng)液中加入不同濃度的氫化可的松干預(yù)后，隨著激素濃度的增加，HCEC中ILRsmRNA的表達也隨之增加，此時IL-6的釋放減少，IL-8的釋放增加；但HCF中TLRsmRNA的表達卻隨激素濃度的增高而下降，并且此時IL-6和IL-8的釋放均下降。免疫熒光組化也顯示了三種情況下HCEC和HCF的TLR2、TLR4在胞內(nèi)均有表達，且強度不同，趨勢與分子水平的表達一致。

5、 結(jié)論：TLR1-10mRNA在HCEC和HCF均有表達，不同的TLRs在同一細胞的表達量不同，而同一TLR在兩種不同細胞的表達量也不同。LPS能改變兩種細胞TLRsmRNA的表達，提示兩種細胞表達的TLRs與角膜抵御細菌的固有免疫密切相關(guān)；糖皮質(zhì)激素可以調(diào)控LPS刺激的HCEC和HCFILRs的表達，即對LPS刺激的HCECTLRs的表達表現(xiàn)輕度促進，而對LPS刺激的HCFTLRs的表達表現(xiàn)出抑制；提示在細菌侵襲角膜的早期，糖