番茄葉綠體谷胱甘肽還原酶基因的克隆和表達分析.pdf

1、逆境脅迫是目前農業(yè)生產上面臨的嚴峻問題之一，逆境會導致植物體內產生大量的活性氧。活性氧可引起蛋白質、膜脂和其他細胞組分的損傷，進而導致細胞及組織死亡。谷胱甘肽還原酶作為植物活性氧清除系統(tǒng)中的一個關鍵酶，對于保護植物免受活性氧的破壞具有十分重要的作用。本研究從番茄葉片中分離到葉綠體谷胱甘肽還原酶基因，并對該基因的表達和功能進行了分析。主要結果如下： 1.利用同源序列設計簡并引物，通過RT-PCR的方法從番茄葉片克隆到谷胱甘肽還原酶

2、基因的中間片段，通過5’-RACE和3’-RACE分別克隆到5’和3’片段，拼接后設計特異引物擴增到全長cDNA，命名為LeGR(EU285581)。該基因全長為1772 bp，ORF為765 bp，編碼255個氨基酸，分子量約為33 kDa。同源序列比較表明，番茄谷胱甘肽還原酶基因的序列與煙草、擬南芥、水稻、豌豆、蕓苔的谷胱甘肽還原酶基因的序列同源性較高。 2.Northern雜交分析顯示，LeGR在不同器官中呈非特異性表達，

3、在葉片、莖、花萼等葉綠素含量高的組織中表達量較高。 3.LeGR受低溫和高溫誘導，其表達量明顯高于常溫下，且其表達水平隨逆境處理時間的延長而變化。4℃處理下6 h表達量最高，40℃處理下12 h表達量最高。 4.將獲得的LeGR與含有35S啟動子的pBI121載體重組，分別構建了正義和反義表達載體，利用農桿菌介導的葉盤法轉化番茄。 5.構建了原核表達載體pET-LeGR，并在大腸桿菌BL21中表達融合蛋白，SDS