miRNA-100在淮安地區(qū)食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討江蘇淮安地區(qū)食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miRNA-100的表達(dá)特征及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：采用Microarray流體芯片技術(shù)及熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitatie realtime Polymerase Chain Reaction，qPCR）技術(shù)檢測(cè)ESCC癌組織及癌旁組織中miRNA-100表達(dá)；采用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)

2、觀察miRNA-100過表達(dá)/沉默后分別對(duì)ESCC細(xì)胞遷移、侵襲的影響；采用CCK8實(shí)驗(yàn)觀察miRNA-100過表達(dá)/沉默后對(duì)ESCC細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)觀察miRNA-100過表達(dá)/沉默后對(duì)ESCC細(xì)胞凋亡的影響；通過miRBase、NCBI、UCSC Browser等在線工具分析miRNA-100序列特征；應(yīng)用miRanda、TargetScan及PicTar預(yù)測(cè)miRNA-100的靶基因，并結(jié)合已證實(shí)的靶標(biāo)基因，進(jìn)行功能

3、富集分析（Gene Ontology）和信號(hào)通路富集分析（Pathway Enrichment）；通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)mTOR是否為miRNA-100的下游直接靶基因，進(jìn)一步采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)miRNA-100過表達(dá)/沉默后ESCC細(xì)胞中mTOR（mammalian target of rapamycin）蛋白表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：⑴流體芯片技術(shù)及qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)的結(jié)果均表明：淮安地區(qū)ESCC

4、癌組織中miRNA-100表達(dá)水平顯著低于癌旁組織（P<0.05）；⑵伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ESCC癌組織miRNA-100表達(dá)水平明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組癌組織（P<0.05）；⑶miRNA-100過表達(dá)可以明顯抑制ESCC細(xì)胞遷移和侵襲，而miRNA-100沉默則對(duì)ESCC細(xì)胞遷移和侵襲具有促進(jìn)作用；⑷miRNA-100過表達(dá)/沉默對(duì)ESCC細(xì)胞增殖和凋亡均無(wú)明顯影響（P>0.05）；⑸miRNA-100在各物種之間具有高度保守性，其靶基因功

5、能分別富集于基因沉默、染色體沉默、細(xì)胞生物合成的負(fù)性調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程（P<0.001），涉及腫瘤信號(hào)通路、溶酶體信號(hào)通路、凋亡信號(hào)通路等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（P<0.05）；⑹雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)及其Western Blot進(jìn)一步檢測(cè)的結(jié)果均表明：mTOR為miRNA-100的直接靶基因。
　　結(jié)論：①淮安地區(qū)ESCC癌組織中miRNA-100表達(dá)水平顯著低于癌旁組織，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；②miRNA-100可能通過調(diào)控mTOR蛋白表達(dá)