孕婦外周血血漿中胎兒游離DNA對(duì)預(yù)測(cè)胎兒血型的研究.pdf

1、背景:新生兒溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn，HDN)是由于胎兒與母親紅細(xì)胞血型不合引起的免疫性溶血性疾病。文獻(xiàn)報(bào)告引起HDN的紅細(xì)胞血型有ABO血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)、MN與Ss血型系統(tǒng)、Kell血型系統(tǒng)、Kidd血型系統(tǒng)、Yt血型系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)血型、Diego血型系統(tǒng)等。但是，臨床上最常見(jiàn)的是胎兒與母親的ABO血型與RhD血型不合引起的HDN。在新生兒溶血病中，母體內(nèi)IgG類(lèi)血型抗體可通

2、過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，與胎兒紅細(xì)胞表面相應(yīng)血型抗原結(jié)合，造成胎兒紅細(xì)胞的免疫性破壞。產(chǎn)前檢測(cè)胎兒的ABO和RhD血型，可以預(yù)測(cè)HDN的發(fā)病率，在臨床上意義重大。在胎兒出生前檢測(cè)胎兒的方法有兩種，包括侵入性和非侵入性的。侵入性的產(chǎn)前檢測(cè)方法，如羊水細(xì)胞離心法、胎盤(pán)組織活檢、臍穿刺、絨膜絨毛取樣和羊膜穿刺術(shù)，可以給孕婦和胎兒帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)，如發(fā)生胎盤(pán)出血和自發(fā)性流產(chǎn)等，臨床應(yīng)用比較慎重。在那些非侵入性的檢測(cè)方法中，主要是通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分離胎兒細(xì)

3、胞，然后再進(jìn)行各項(xiàng)檢測(cè)。然而，這種方法對(duì)操作人員的技術(shù)要求較高，且需要一些昂貴的儀器設(shè)備。
　　 1997年，Lo等研究發(fā)現(xiàn)，孕婦外周血血漿中含有胎兒的游離DNA。這種DNA有三種最為可能的來(lái)源：胎兒造血細(xì)胞、胎盤(pán)、胎兒和孕婦之間DNA分子的直接轉(zhuǎn)運(yùn)。胎兒的游離DNA濃度還與孕齡有關(guān)，在孕期的第四周就能檢測(cè)到這種DNA，而且其濃度會(huì)隨著孕齡的增加而升高，并在孕期的最后八周內(nèi)達(dá)到頂峰。此外，除了孕婦外周血中胎兒DNA的濃度在整個(gè)孕

4、期會(huì)發(fā)生規(guī)律性的變化外，在胎兒處于某些疾病狀態(tài)的時(shí)候，與正常水平相比，這種DNA濃度會(huì)出現(xiàn)顯著增加，臨床上可以將胎兒游離DNA應(yīng)用于某些胎兒遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷。本研究根據(jù)人類(lèi)ABO血型和RhD血型的分子基礎(chǔ)，利用孕婦外周血血漿中胎兒游離DNA來(lái)產(chǎn)前預(yù)測(cè)胎兒的ABO和RhD血型，是一種新的、非侵入性的檢測(cè)方法，避免了對(duì)孕婦創(chuàng)傷和導(dǎo)致胎兒自發(fā)流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。
　　 目的:利用孕婦外周血血漿中的胎兒游離DNA來(lái)產(chǎn)前檢測(cè)胎兒ABO及RhD

5、血型，預(yù)防新生兒溶血病。
　　 方法:(1)隨機(jī)收集90例O型孕婦的外周血及配偶血樣，采用血型血清學(xué)方法鑒定夫妻雙方的ABO血型，2-巰基乙醇中和IgM抗-A、抗-B后，倍比稀釋法檢測(cè)孕婦外周血中IgG抗-A和抗-B效價(jià)。提取胎兒游離DNA，通過(guò)檢測(cè)SRY基因來(lái)驗(yàn)證胎兒游離DNA是否存在，選擇SRY基因陽(yáng)性樣本，使用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法來(lái)產(chǎn)前檢測(cè)胎兒ABO血型的基因型，用血型血清學(xué)方法檢測(cè)胎

6、兒出生后的ABO血型，并與產(chǎn)前運(yùn)用DNA預(yù)測(cè)的結(jié)果比較。(2)收集有既往妊娠史的RhD陰性孕婦外周血80例及配偶血樣，血型血清學(xué)方法鑒定夫妻雙方的RhD血型，采用間接抗球蛋白法和吸收放散實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)RhD陰性孕婦紅細(xì)胞上的的D抗原，提取DNA，通過(guò)檢測(cè)SRY基因來(lái)驗(yàn)證胎兒游離DNA是否存在，選擇SRY基因陽(yáng)性樣本，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)來(lái)檢測(cè)胎兒的RhD血型，用血型血清學(xué)方法檢測(cè)胎兒出生后的RhD血型，并與

7、產(chǎn)前運(yùn)用DNA預(yù)測(cè)的結(jié)果進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:在90例O型孕婦外周血血漿樣本中，SRY基因陽(yáng)性率為52.22％(47/90例)；80例RhD孕婦外周血血漿樣本中，SRY基因陽(yáng)性率為52.50％(42/80例)。將產(chǎn)前運(yùn)用DNA預(yù)測(cè)的胎兒血型與胎兒出生后的血清學(xué)方法鑒定的血型相比較，各種血型的符合率差異明顯。在ABO血型中，A型的符合率為84.21％(16/19例)，B型的符合率為81.25％(13/16例)，0型的符合率為75