甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞炎癥反應(yīng)的初步研究.pdf

1、目的：
　?。?）通過(guò)組織塊法體外培養(yǎng)人頰黏膜成纖維細(xì)胞（HBMPs）建立細(xì)胞模型，為后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。（2）①觀察不同濃度甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞增殖的影響。②通過(guò)脂多糖（LPS）刺激建立人頰黏膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞炎癥模型，同時(shí)加入甘草甜素進(jìn)行干預(yù)，觀察白細(xì)胞介素-6（IL-6）的濃度，來(lái)探討甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。
　　方法：
　　（1）取OLP患者的正常頰黏膜，組織塊法培養(yǎng)人頰黏膜成纖維

2、細(xì)胞，經(jīng)過(guò)傳代、分離、純化，取第四代細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，證明所得細(xì)胞為HBMFs。（2）①取生長(zhǎng)良好的頰黏膜成纖維細(xì)胞，加入0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的甘草甜素,培養(yǎng)24h、48h、72h后,經(jīng)MTT法檢測(cè)每孔的光密度值(OD)。②第4代成纖維細(xì)胞為對(duì)照組、加入脂多糖為炎癥組、同時(shí)加入脂多糖和甘草甜素為實(shí)驗(yàn)組，用ELISA法分別檢測(cè)三組IL-6的濃度。

3、　　結(jié)果：
　?。?）通過(guò)組織塊法培養(yǎng)的人頰黏膜成纖維細(xì)胞，經(jīng)傳代、分離、純化至第四代，得到純度高、活性好的HBMPs。倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或者星形，細(xì)胞核清晰，圓形或橢圓形居中，胞漿豐富。細(xì)胞密度高時(shí)交織排列成“網(wǎng)狀”或者“束狀”。免疫組織化學(xué)法顯示細(xì)胞抗角蛋白染色陰性，抗波形蛋白染色陽(yáng)性。（2）①M(fèi)TT法結(jié)果：與0μg/ml對(duì)照組比較，除了25μg/ml組在24h時(shí)間段內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組在各時(shí)段差異均有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義。甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，在一定范圍內(nèi)隨藥物濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)，具有明顯的時(shí)間和劑量依賴性。②ELISA法結(jié)果：對(duì)照組有微量的IL-6產(chǎn)生，炎癥組分泌IL-6明顯高于對(duì)照組,差異有顯著性(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組IL-6分泌量明顯低于炎癥組,差異有顯著性(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　?。?）人頰部固有層的主要細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，組織塊法培養(yǎng)頰黏膜成纖維細(xì)胞為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞模型。（2）①