南瓜多糖對鏈脲菌素誘導(dǎo)的胰島損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、第一部分：南瓜多糖對大鼠鏈脲菌素性胰島損傷及血糖的影響 目的：制備鏈脲菌素性糖尿病大鼠模型，觀察南瓜多糖(PP)對糖尿病大鼠的降血糖作用及對糖尿病大鼠胰島損傷的保護作用和作用機制。 方法：大鼠腹腔注射鏈脲菌素(STZ)60mg／kg，建立鏈脲菌素性糖尿病模型。不同濃度的PP灌胃進行治療，葡萄糖氧化酶法檢測血糖值，觀察PP灌胃后對STZ致糖尿病模型大鼠的降糖作用；放免法測定血清胰島素；通過測定血清中SOD、MDA、NO含量

2、觀察即對糖尿病大鼠自由基損傷的保護作用；透射電子顯微鏡觀察鏈脲菌素性糖尿病大鼠胰島細胞的超微結(jié)構(gòu)的變化；采用免疫組化的方法分析PP對鏈脲菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表達的影響；采用RT-PCR的方法觀察PP對STZ損傷的大鼠胰島凋亡調(diào)控基因Bax和Bcl-2表達的影響。 結(jié)果：(1)PP中劑量和大劑量組能明顯降低STZ損傷的糖尿病模型大鼠的血糖值；(2)PP大劑量治療三周后，能升高糖尿病大鼠血清中的胰島素值；(3)PP

3、中、大劑量組糖尿病大鼠血清中SOD值明顯增加，MDA、NO的量顯著減少；(4)透射電鏡觀察大鼠胰島細胞的超微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)PP對STZ損傷的胰島細胞具有保護作用；(5)PP小、中、大劑量組大鼠胰腺組織中Fas／Fas-L蛋白的表達率明顯低于STZ模型組；(6)給藥三周后，PP小劑量、中劑量、大劑量組大鼠Bcl-2基因的表達顯著增加，PP中劑量、大劑量組大鼠Bax基因的表達顯著下降，即中劑量、大劑量組大鼠Bcl-2與Bax的比值顯著增加。

4、 結(jié)論：南瓜多糖(PP)可降低鏈脲菌素性糖尿病大鼠的空腹血糖值，并且對鏈脲菌素引起的大鼠胰島損傷具有保護作用。其機制可能與PP減少胰島細胞的凋亡有關(guān)。 第二部分：南瓜多糖對鏈脲菌素誘導(dǎo)的大鼠胰島β細胞損傷的保護作用 目的：在原代培養(yǎng)的大鼠胰島細胞上，觀察南瓜多糖對鏈脲菌素損傷的大鼠胰島β細胞的保護作用及其作用機制。 方法：將原代培養(yǎng)的大鼠胰島細胞分為6組：即正常對照組(0．5％DMSO培養(yǎng)液)；STZ損傷模型

5、組(8mmol／1STZ)；Gl-PS陽性對照組(0．5mg／mlGl-PS)；PP小劑量組(0．25mg／mlPP)；PP中劑量組(0．5mg／mlPP)；PP大劑量組(1mg／mlPP)。測定各組胰島細胞培養(yǎng)液中的SOD、MDA、NO含量；采用MTT、Hochest染色、PI單染FCM檢測各組細胞活力、凋亡率；采用RT-PCR的方法觀察PP對STZ誘導(dǎo)的大鼠胰島細胞損傷的凋亡調(diào)控基因Bax／Bcl-2表達的影響。 結(jié)果：(1

6、)MTT比色實驗顯示：PP可以增強STZ損傷的胰島細胞的活力；(2)PP中劑量、大劑量組胰島細胞培養(yǎng)基內(nèi)SOD值明顯增加，MDA、NO的量顯著減少；(3)Hochest染色后，觀察到PP可以減少STZ損傷的胰島細胞的凋亡率；(4)PI單染FCM檢測結(jié)果顯示，PP可以減少STZ損傷的胰島細胞的凋亡率；(5)RT-PCR測定顯示PP可減少胰島細胞Bax、增加胰島細胞Bcl-2基因的表達。 結(jié)論：南瓜多糖對鏈脲菌素損傷的大鼠胰島β細胞