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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)是位于線粒體內(nèi)膜的陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它可調(diào)節(jié)能量代謝并減少ROS的生成。UCP2的神經(jīng)保護(hù)作用在帕金森病、腦缺血、癲癇等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中得到廣泛證實(shí)。研究表明,膿毒癥時(shí),胰島素不僅有降低血糖、調(diào)節(jié)代謝的作用,還具有減少ROS產(chǎn)生、對(duì)抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、保護(hù)線粒體等作用,但其具體機(jī)制并不十分明確。既往有體外研究表明胰島素可能通過(guò)上調(diào)UCP2的表達(dá),減少活性氧(ROS)的生成,進(jìn)而發(fā)揮抗氧化的保護(hù)作
2、用。本研究擬探討胰島素對(duì)膿毒癥腦組織損傷的保護(hù)作用,探討UCP2在膿毒癥大鼠腦組織中的表達(dá),及胰島素對(duì)其表達(dá)的影響,探討UCP2在胰島素保護(hù)作用中的可能作用,進(jìn)一步為膿毒癥時(shí)胰島素的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
方法:
行胰島素濃度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn),根據(jù)大鼠血糖情況及生存率確定胰島素濃度后,將50只SPF級(jí)雄性SD大鼠,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=10)、膿毒癥組(n=20)和胰島素組(n=20)。通過(guò)腹腔注射革
3、蘭陰性菌脂多糖(LPS)15mg/kg建立膿毒癥大鼠模型。胰島素組在造模前30分鐘予皮下注射長(zhǎng)效胰島素1U/kg(預(yù)實(shí)驗(yàn)確定),膿毒癥組皮下注射等量生理鹽水。LPS造模后24h,每組各取8只處死,留取大腦皮質(zhì)。提取大腦皮質(zhì)線粒體測(cè)定線粒體活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)的蛋白表達(dá);TUNEL
4、染色檢測(cè)大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡;蘇木精-伊紅(HE)染色觀察大腦皮質(zhì)病理改變;RT-PCR檢測(cè)大腦皮質(zhì)UCP2的mRNA表達(dá);Western blot和免疫組化檢測(cè)皮質(zhì)組織UCP2蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
1.與正常對(duì)照組相比,膿毒癥組及胰島素組大鼠皮質(zhì)組織線粒體ROS和MDA水平明顯升高,而SOD活力明顯下降,均P<0.05;而與膿毒癥組相比,胰島素組大鼠皮質(zhì)組織線粒體ROS和MDA水平下降,且SOD活力回升,均P<0.
5、05;
2.與正常對(duì)照組相比,膿毒癥組及胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加,膿毒癥組抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下降,而促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase-9表達(dá)升高,均P<0.05;而與膿毒癥組相比,胰島素組大鼠皮質(zhì)組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡減少,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)升高,而促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase-9表達(dá)下降,均P<0.05;
3.與正常對(duì)照組相比,膿毒癥組和胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)
6、組織HE染色可見(jiàn)明顯異常病理改變,而與膿毒癥組相比,胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)組織病理改變較膿毒癥組減輕;
4.與正常對(duì)照組相比,膿毒癥組大鼠皮質(zhì)組織UCP2mRNA和蛋白表達(dá)均升高;而與膿毒癥組相比,胰島素組大鼠皮質(zhì)組織UCP2mRNA和蛋白表達(dá)較均膿毒癥組升高。
結(jié)論:
1.U/kg長(zhǎng)效胰島素皮下注射可有效改善膿毒癥大鼠生存
2.UCP2在膿毒癥大鼠腦組織中表達(dá)上調(diào);
3.胰島素可上調(diào)膿毒
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