痹腫消湯干預(yù)活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本文的目的是觀察正常人及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)蛋白質(zhì)的雙向凝膠電泳圖譜，并分析其差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，尋找RA疾病相關(guān)蛋白，探討RA的發(fā)病機(jī)制。觀察痹腫消湯(Bizhongxiao decoction，BZXD)干預(yù)前后RA患者PBMCs的差異蛋白質(zhì)表達(dá)，探討B(tài)ZXD治療RA的作用機(jī)理。 文

2、中選取18例早期活動(dòng)期RA患者，隨機(jī)分為兩組，一組為治療組(n=9，簡稱BZXD組)，口服痹腫消湯。另一組為對(duì)照組(n=9，簡稱MTX組)，予口服甲氨蝶呤(Methotrexate MrX)和普威。9名健康正常成年人為正常對(duì)照組。觀察并比較兩組患者治療前后的晨僵(morning stiffness)時(shí)間、握力、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)(Tenderjoint count，TJC)、關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)(Tenderjoint count index，TJI)

3、、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)(Swollenjoint count，SJC)、關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)(Swollen joint count index，SJI)以及治療前后的血沉(erthrocyte sedimentation rate，ESR)，C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)，類風(fēng)濕因子(rheuatoid factor,RF)的變化。用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMCs，抽提PBMCs中的蛋白，采用固相pH梯度(immobilize

4、d pH gradient，IPG)雙向凝膠電泳(two．dimensional gel electrophoresis，2-DE)分離正常人及RA患者PBMCs總蛋白質(zhì)。凝膠經(jīng)考染顯色后，PDQuest圖像分析軟件進(jìn)行比較分析、識(shí)別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)進(jìn)行鑒定，然后搜索數(shù)據(jù)庫鑒定部分差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetransoftption

5、 polymerase chain reaction，RT-PCR)方法驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白。 1.臨床療效觀察：治療三個(gè)月后，兩組患者的晨僵、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、握力等主要癥狀與體征均較前均有顯著改善(p<0.01或<0.05)；但BZXD組在改善關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)方面優(yōu)于MTX組(p<0.05)。經(jīng)治療后，兩組的ESR，CRP等炎性指標(biāo)較前有明顯降低(p<0.01或p<0.05)；BZXD組

6、的ESR、CRPT降較MTX組更明顯(p<0.05)。BZXD~床顯效率為77.8﹪，總有效率為88.9﹪；MTX組臨床顯效率為55.6﹪，總有效率為77.8﹪；BZXD組總有效率優(yōu)于MTX組(p<0.05)。 2.各組PBMCs總蛋白2-DE圖譜的建立及差異蛋白質(zhì)識(shí)別：分別獲得正常人、RA患者治療前、后PBMCs總蛋白2-DE圖譜，通過比較分析，差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為23，選取18個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，成功鑒定15個(gè)蛋白質(zhì)，與正常人

7、比較其中8個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在RA中表達(dá)上調(diào)，7個(gè)表達(dá)下調(diào)。與MTX組比較，BZXD組有6個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)差異更為明顯。 3.差異蛋白質(zhì)點(diǎn)質(zhì)譜鑒定及蛋白功能分類：發(fā)現(xiàn)并鑒定了正常人、RA患者治療前、治療后PBMCs中的差異表達(dá)大于2倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)15個(gè)。根據(jù)NCBI、MSDB數(shù)據(jù)庫中提供的的信息，這些差異蛋白質(zhì)的功能涉及物質(zhì)代謝、能量產(chǎn)生、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、抗氧化應(yīng)激、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞骨架等。其中apolipoprotein A-I、actin，bet

8、a、Talin 1、ATP synthase，phosphatidylethanolamine-binding protein、Prohibitin、Ras related protein、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K.等蛋白可能與RA病變密切相關(guān)。 (4)差異蛋白驗(yàn)證結(jié)果：RT-PCR方法證實(shí)ApoA-I在正常組、RA治療組、對(duì)照組的表達(dá)水平與2-DE結(jié)果一致。 研究結(jié)論：