類風濕關節(jié)炎外周血破骨細胞活性研究.pdf

1、第一部分類風濕關節(jié)炎外周血破骨細胞活性的研究
　　 目的：研究類風濕關節(jié)炎(RA)患者外周血破骨細胞前體細胞(OCP)分化能力及血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。
　　 方法：取7例RA患者和9名健康對照的外周血，分離外周血單個核細胞(PBMCs)，采用RANKL和M-CSF體外誘導培養(yǎng)破骨細胞(OC)。對培養(yǎng)14天后的細胞進行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色，計數TRAP染色陽性、胞核≥3個的細胞(定義為OC)。

2、骨吸收實驗考察OC的功能。運用ELISA方法檢測15例RA患者和9名健康對照血清TNF-α水平。對RA患者OC數量和TNF-α水平與疾病活動性指標包括紅細胞沉降率(ESR)、C反應蛋白(CRP)進行相關分析。
　　 結果：(1)RA患者外周血生成OC數量顯著高于健康對照，分別為27.8±10.8個/10個視野(-x±SD)和14.4±6.1個/10個視野(P＜0.05)；(2)RA患者TNF-α水平顯著高于健康對組，分別為18.

3、8±5.2 pg/ml和9.5±3.0 pg/ml(P＜0.05)；(3)RA患者OC數量與ESR正相關(r=0.912，p=0.000)，與CRP無顯著相關性；(4)RA患者外周血TNF-α水平與ESR顯著正相關(r=0.936，p=0.000)，與CRP無顯著相關性；(5)RA患者外周血TNF-α水平與OC數量顯著正相關(r=0.913，p=0.000)。
　　 結論：RA患者外周血OCP數量顯著增高，血清TNF-α水平顯著

4、增高，二者可能是造成炎癥局部OC活性增高進而引起關節(jié)骨質破壞的機制。
　　 第二部分甲氨蝶呤對類風濕關節(jié)炎外周血破骨細胞活性的影響
　　 目的：研究甲氨喋呤(MTX)對類風濕關節(jié)炎(RA)外周血破骨細胞前體細胞(OCP)分化能力及外周血單個核細胞(PBMCs)分泌TNF-α的影響。
　　 方法：采集3例健康志愿者者PBMCs，在含不同濃度(0 nM、1 nM、10 nM、102nM、103nM和104nM)的MT

5、X的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24、48、72小時，采用CCK8方法檢測細胞活力。采用RANKL和M-CSF誘導PBMCs使其向OC分化，在培養(yǎng)液中加不同濃度(1 nM、10 nM和102nM)MTX，14天后對細胞進行TRAP染色，計數TRAP染色陽性、胞核≥3個的細胞(定義為OC)。收集48小時的培養(yǎng)上清液，運用ELISA方法檢測其TNF-α水平。
　　 結果：(1)用CCK8檢測顯示較低濃度(1 nM、10 nM和102nM)MTX對細

6、胞活力影響不大，與對照組(0 nM)無顯著差別。較高濃度MTX(103 nM和104nM)使細胞活力顯著降低；(2)10 nM和102nM的MTX加入OC培養(yǎng)體系，產生OC的數量顯著低于對照組，分別為26.3±7.6(-x±SD)、13.6±6.0和35.8±6.6個/10個視野(P＜0.05)；(3)10 nM和102nM的MTX加入OC培養(yǎng)體系，培養(yǎng)上清液中的TNF-α水平也較對照組(0 nM)顯著降低，分別為45.3±4.7、39