紫杉醇納米粒治療卵巢癌轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、紫杉醇是從紅豆杉屬植物紫杉的樹(shù)干和樹(shù)皮中提取的化療藥，目前已成為治療卵巢癌的一線藥物。由于紫杉醇難溶于水，目前的紫杉醇制劑中都加入了聚氧乙基蓖麻油及無(wú)水乙醇，在體內(nèi)會(huì)引起組胺的釋放，引發(fā)高敏反應(yīng)。納米給藥系統(tǒng)是目前受到廣泛關(guān)注的新型給藥系統(tǒng)，具有穩(wěn)定的理化特性、良好的生物相容性、緩釋性，更為重要的是特定大小的納米粒具有腫瘤組織及淋巴系統(tǒng)的靶向性，是較為理想的抗腫瘤藥物的載藥系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)研制紫杉醇納米粒，采用腹腔給藥途徑，考察其對(duì)大鼠及裸

2、鼠腹腔種植性卵巢癌的治療效果，并探討其作用機(jī)制。 1．紫杉醇納米制劑的制備及其性質(zhì) 目的：制備紫杉醇納米，測(cè)其粒徑及包封率，了解其急性毒性；方法：采用超聲乳化法制備紫杉醇納米粒及納米乳劑，激光散射儀測(cè)粒徑分布，高效液相色譜儀測(cè)藥物包封率；并采用健康SD大鼠進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)；結(jié)果：數(shù)種紫杉醇納米粒PLA粒徑為200納米，PELA粒徑為180納米，微乳粒徑為20納米，涂層PLA粒徑為250納米；包封率為70％，動(dòng)物無(wú)死亡。結(jié)

3、論：紫杉納米制劑粒徑分布均勻，包封率高，無(wú)急性毒性，可進(jìn)一步用于荷瘤鼠實(shí)驗(yàn)。 2．采用F344大鼠卵巢癌模型對(duì)紫杉醇納米制劑進(jìn)行處方篩選 目的：探討不同劑量紫杉醇納米制劑腹腔給藥對(duì)荷瘤鼠的療效及毒性作用。方法：將大鼠卵巢癌細(xì)胞NuTul9注入F344大鼠腹腔，建立大鼠卵巢癌模型共55只，隨機(jī)分為六組，生理鹽水組為5只，用藥組每組10只(10mg／kg5只，5mg／kg5只)，每周腹腔給藥一次，共給藥5次。比較生存率及毒性

4、反應(yīng)。結(jié)果：PELA、涂層PLA、微乳高劑量及低劑量均出現(xiàn)明顯副反應(yīng)，動(dòng)物在用藥過(guò)程中陸續(xù)死亡。PLA高劑量組出現(xiàn)輕微體重減輕，低劑量組未出現(xiàn)明顯副反應(yīng)，與市售紫杉醇相比，生存率明顯增高。結(jié)論：PLA具有較好的安全性及療效，可用于進(jìn)一步研究。 3．紫杉醇納米粒PLA對(duì)大鼠荷人卵巢癌治療作用及機(jī)制 目的：觀察紫杉醇納米粒PLA經(jīng)腹腔給藥后對(duì)大鼠卵巢癌的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。方法：大鼠腹腔種植瘤模型40只，隨機(jī)分為4組

5、，PLA組及市售紫杉醇組各15只，生理鹽水組5只，空白支架組5只。劑量均為5mg／kg，每周給藥一次，共五次。用藥組分別于末次給藥后4h、8h、12h、24h、48h后處死3只大鼠，取大鼠的血漿、卵巢腫瘤、心、肝、盆腔淋巴結(jié)及腎臟組織，測(cè)量各組動(dòng)物的荷瘤量及腹水量，并分別以免疫組化法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤組織增殖與凋亡，RT-PCR法檢測(cè)腫瘤組織癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mRNA表達(dá)，HE染色檢測(cè)盆腔淋巴結(jié)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移狀況，HPLC檢測(cè)血漿及各臟器不

6、同時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度。結(jié)果：紫杉醇納米粒治療組動(dòng)物的荷瘤量及腹水量分別為[(4．56±O．11)g]，[(3．55±0．50ml].明顯低于市售紫杉醇治療組[(10．13±0．52)g]，[(30．45±1．55)ml](P＜0．01)；免疫組化檢測(cè)納米粒組PCNA陽(yáng)性細(xì)胞為[(20±5)1，低于市售紫杉醇治療組[(85±10)](P＜O．01)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)納米粒組腫瘤細(xì)胞S期比例為(4．00±l．15)％，市售紫杉醇組組為(8．09

7、±1．20)％，兩者差異有顯著性。半定量RT-PCR法檢測(cè)納米粒組MMP9mRNA表達(dá)水平為[(0．85±O．15)]，明顯低于市售紫杉醇組[(1．75±0．20)](P＜0．01)，而TIMPmRNA表達(dá)為[(1．55±0．18)]，顯著高于市售紫杉醇組[(0．88±O．12)](P＜0．01)]。HPLC檢測(cè)納米粒組淋巴結(jié)藥物濃度隨時(shí)間逐漸增高，至48h時(shí)為[(0．966±0．025)]，市售紫杉醇組在48h己無(wú)法檢出藥物濃度(P＜

8、0．001)。結(jié)論：紫杉醇納米粒經(jīng)腹腔給藥能有效抑制大鼠卵巢癌生長(zhǎng)，其機(jī)制為促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖；抑制促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移基因的表達(dá)。同時(shí)紫杉醇納米粒具有淋巴靶向性。 4．紫杉醇納米粒對(duì)裸鼠腹腔種植性卵巢癌的治療作用 目的：探討紫杉醇納米粒經(jīng)腹腔給藥對(duì)裸鼠人源性卵巢癌的治療效果；方法：將SKOV3細(xì)胞注入裸鼠腹腔，建立裸鼠腹腔種植卵巢癌模型40只，隨機(jī)分為四組，分別給予紫杉醇納米粒、市售紫杉醇、納米?？瞻字Ъ芗吧?/p>

9、鹽水，劑量為5mg／kg,每周一次，共五次。治療結(jié)束后一周，處死裸鼠，比較荷瘤量及腹水量；取腫瘤組織作流式細(xì)胞分析；取盆腔淋巴結(jié)組織作石蠟切片，HE染色，比較腫瘤轉(zhuǎn)移狀況。結(jié)果：PLA組裸鼠腫瘤瘤重及腹水量分別為(0．554-0．05)g,(1．854-0．50)ml，明顯低于市售紫杉醇組(O．85±0．10)g，(4．05±0．95)ml(P＜O．01)；流式細(xì)胞檢測(cè)表明PLA組腫瘤細(xì)胞中S期占(9．65±0．55)％，低于市售紫杉醇

10、組[(23．43±2．35)％](P＜0．01)，PLA組腫瘤細(xì)胞凋亡占(54．38±8．15)％，高于市售紫杉醇組[(12．86±5．25)％](P＜0．01)。HE染色表明納米粒組盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和肝臟轉(zhuǎn)移率分別為10％和20％，均低于市售紫杉醇組(分別為50％和60％)；結(jié)論：紫杉醇納米粒能有效抑制裸鼠卵巢癌的生長(zhǎng)，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制腫瘤經(jīng)淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移，同時(shí)阻止腫瘤細(xì)胞進(jìn)入S期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 總之，本研究結(jié)果提示紫