糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)水平對(duì)激素治療肺內(nèi)、外源性ALI-ARDS療效的影響.pdf

1、目的：急性肺損傷(ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是指由心源性以外的肺內(nèi)外各種致病因素導(dǎo)致的急性進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭。ALI/ARDS具有性質(zhì)相同但程度不同的病理生理改變，嚴(yán)重的ALI或ALI的最終階段被定義為ARDS。 ALI/ARDS的病因復(fù)雜，有100多種疾病可并發(fā)ARDS。臨床上將其劃分為肺內(nèi)源性ARDS和肺外源性ARDS.前者包括：肺部感染、胃內(nèi)容物吸入、吸入有毒氣體等；后者包括：膿毒癥、休克、嚴(yán)重的非胸部創(chuàng)傷

2、和重癥胰腺炎等。而臨床上最常見的形式多見于膿毒癥時(shí)的內(nèi)毒素?fù)p害(約40％)，其次是胃內(nèi)容物誤吸引起的ALI/ARDS，占30％左右。因此，目前有關(guān)ALI/ARDS的實(shí)驗(yàn)研究多采用這兩種致?lián)p傷模型，是符合臨床情況的。 糖皮質(zhì)激素(GCs)是由腎上腺皮質(zhì)束狀帶分泌的重要類固醇類內(nèi)分泌激素，有重要的生理作用。臨床上，GCs是治療ALI/ARDS較為普遍的用藥。從理論上講，GCs具有抑制炎癥反應(yīng)、減輕細(xì)胞因子對(duì)肺組織的損傷和抑制纖維化等

3、作用，故用于治療ALI/ARDS應(yīng)收到很好的效果，但事實(shí)并非如此。長期以來，GCs在ALI/ARDS中的應(yīng)用價(jià)值始終褒貶不一。然而，在大量的臨床實(shí)踐中，由于似乎總能從糖皮質(zhì)激素治療中受益，故GCs對(duì)ALI/ARDS的治療作用一直受到不同程度的認(rèn)可，但不同患者治療效果差異較大，其原因有待進(jìn)一步研究。 糖皮質(zhì)激素受體(GR)是受體超家族中的重要成員，也是一種典型的激素依賴性核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄的激活和抑制，在機(jī)體的生命活

4、動(dòng)中具有重要作用。由于GR是GCs生物學(xué)作用發(fā)揮的介導(dǎo)者，其表達(dá)水平和功能狀態(tài)必將影響組織細(xì)胞對(duì)GCs的敏感性，從而影響GCs的治療效果。許多研究指出用藥前測定GR可以作為推測GCs治療反應(yīng)和確切治療方案的一個(gè)指標(biāo)。 臨床上，人們發(fā)現(xiàn)GCs治療不同病因的ALI/ARDS的效果存在不同，但對(duì)其潛在機(jī)理尚未闡明。近年來，國內(nèi)外許多研究發(fā)現(xiàn)ALI/ARDS也存在GCs-GR系統(tǒng)紊亂現(xiàn)象，這對(duì)進(jìn)一步探討本病的發(fā)病機(jī)理與治療效果的關(guān)系提供

5、了重要依據(jù)。 因此，本研究復(fù)制了肺內(nèi)、外源性兩種病因的ALI/ARDS的動(dòng)物模型，對(duì)照比較血清中糖皮質(zhì)激素的水平，外周血單型核白細(xì)胞(PBMC)上GR表達(dá)水平及糖皮質(zhì)激素干預(yù)后對(duì)其表達(dá)水平的影響。探討糖皮質(zhì)激素的作用機(jī)制及糖皮質(zhì)激素受體的改變對(duì)疾病預(yù)后的影響，為臨床上選擇性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療不同病因的ALI提供理論上的依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)分組和模型復(fù)制：健康雄性SD大鼠96只隨機(jī)分為6組：①生理鹽水(NS)組：尾靜脈注射生

6、理鹽水0.6ml②LPS組：經(jīng)尾靜脈注射LPS(8mg/kg)③HCl組：氣管內(nèi)緩慢滴注HCl(pH1.8，2ml/kg)④NS+Dex組，⑤LPS+Dex組，⑥HCl+Dex組。④、⑤、⑥三組為GCs干預(yù)組。模型復(fù)制前2天腹腔注射Dex2mg/kg，1次/天，模型復(fù)制前再注射一次，計(jì)3次。各項(xiàng)指標(biāo)測定：模型復(fù)制成功后，收集標(biāo)本，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測定。外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)上的GR水平和血清GCs濃度測定：用密度梯度離心法將收集的肝素

7、抗凝血中的外周血單個(gè)核細(xì)胞分離出來，并將細(xì)胞懸于RPMIl640培養(yǎng)基中，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)成所需細(xì)胞濃度。最后用靈敏度較高的3H—地塞米松(3H—DEX)放射性配體結(jié)合法測定GR水平。血清中的GCs濃度用放免法測定，按皮質(zhì)醇放免試劑盒中的操作步驟進(jìn)行。 病理組織學(xué)檢查：觀察模型復(fù)制后兩種肺損傷模型肺組織標(biāo)本的改變，然后進(jìn)行肺組織病理切片，在顯微鏡下觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)改變并對(duì)其進(jìn)行半定量評(píng)分。 結(jié)果：肺損傷生物學(xué)指標(biāo)和光鏡

8、下肺組織病理評(píng)分等指標(biāo)，HCl組和LPS組均高于NS組，而在兩個(gè)肺損傷模型組的比較中，除BALF蛋白含量這一指標(biāo)，HCl組顯著高于LPS組以外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異。這些指標(biāo)在LPS+Dex組均顯著下降，而在HCl+Dex組，這些指標(biāo)的變化卻不一致，肺病理評(píng)分未有明顯改善，肺損傷生物學(xué)三個(gè)指標(biāo)的改善也均不如LPS+Dex組明顯。 與NS組比較，HCl組GR表達(dá)水平顯著下降，而LPS組雖有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LPS

9、+Dex組的GR表達(dá)水平與GCs均明顯高于HCl+Dex組。Dex對(duì)LPS組和HCl組的GR表達(dá)水平均無明顯影響，但二者的升降趨勢是相反的；而對(duì)GCs濃度的影響二者均有顯著性差異。 結(jié)論： 1.ALI/ARDS導(dǎo)致機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)，使GR表達(dá)減少，引起受體水平上的腎上腺皮質(zhì)功能不全，這可能是肺損傷發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。 2.激素干預(yù)對(duì)這兩個(gè)肺損傷模型的PBMC上的GR表達(dá)水平的影響不同，其機(jī)制可能與不同病因所致