羅格列酮和腫瘤壞死因子α對(duì)脂肪細(xì)胞線粒體生物合成及ZAG表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀察羅格列酮和腫瘤壞死因子α(TNF-α)對(duì)脂肪細(xì)胞線粒體生物合成和ZAG表達(dá)的影響。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞,分別以不同濃度的羅格列酮和TNF-α干預(yù)48h,提取總RNA,采用RT-PCR方法檢測(cè)PGC-1α、TFAM、NRF-1/2及ZAG mRNA表達(dá)水平。在此實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,驗(yàn)證羅格列酮和TNF-α對(duì)脂肪細(xì)胞線粒體合成相關(guān)因子及ZAG表達(dá)的影響,將分化成

2、熟的脂肪細(xì)胞隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、羅格列酮組(50μM)、TNF-α組(30ng/mL)、羅格列酮+TNF-α組(RT組),采用RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)PGC-1α、TFAM、NRF-1/2及ZAG mRNA和蛋白表達(dá);采用線粒體特異性染料Mito Traker Green預(yù)染成熟脂肪細(xì)胞,激光共聚焦顯微鏡下觀察線粒體熒光強(qiáng)度;采用 ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中FFA濃度。
　　結(jié)果:
　　1、羅格

3、列酮單獨(dú)干預(yù)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,ZAG及 PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P<0.01);
　　2、TNF-α單獨(dú)干預(yù)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,ZAG及PGC-1α、TFAM、NRF-2 mRNA表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P<0.01),且以TNF-α組(100ng/mL)降低最為顯著;TNF-α組(10-100ng/mL)NRF-1mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.01),但

4、TNF-α組(1ng/mL) NRF-1 mRNA表達(dá)無(wú)顯著差異(P>0.05);
　　3、羅格列酮(50μM)和TNF-α(30ng/mL)干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞48h,羅格列酮組和羅格列酮+TNF-α組線粒體熒光強(qiáng)度高于對(duì)照組,而TNF-α組線粒體熒光強(qiáng)度低于對(duì)照組;
　　4、羅格列酮(50μM)和TNF-α(30ng/mL)干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞48h,羅格列酮組ZAG、PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mR

5、NA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P<0.01);TNF-α組ZAG、PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P<0.01);羅格列酮+TNF-α組ZAG、TFAM、NRF-2 mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.01),而NRF-1mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.05),PGC-1α mRNA表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05);
　　5、羅格列酮(50μM)和TNF-α(30ng/mL)干預(yù)3T3-L1脂

6、肪細(xì)胞48h,羅格列酮組ZAG、NRF-1和PGC-1α、TFAM蛋白表達(dá)水平高于對(duì)照組(分別為P<0.05, P<0.01),NRF-2蛋白表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05);TNF-α組ZAG、NRF-1和TFAM、NRF-2蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(分別為 P<0.05,P<0.01),PGC-1α蛋白表達(dá)著差異無(wú)顯性(P>0.05);羅格列酮+TNF-α組ZAG和PGC-1α蛋白表達(dá)水平高于對(duì)照組(分別為P<0.01,P<0.05)

7、,NRF-2蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.01),TFAM、NRF-1蛋白表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05);
　　6、羅格列酮(50μM)和TNF-α(30ng/mL)干預(yù)3T3-L1脂肪細(xì)胞48h,羅格列酮組 FFA濃度低于對(duì)照組,TNF-α組 FFA濃度高于對(duì)照組,差異均有顯著性(P<0.05),羅格列酮+TNF-α組濃度表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1)羅格列酮促進(jìn)脂肪細(xì)胞ZAG和PGC-