腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及轉(zhuǎn)化生長因子-β-,2-在形覺剝奪性近視中作用的實驗研究.pdf

1、本實驗擬在建立豚鼠形覺剝奪性近視模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測遮蓋眼視網(wǎng)膜BDNF、TGF-β2蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、鞏膜BDNF、TGF-β2mRNA表達(dá)，另外應(yīng)用RT-PCR及Westernblotting技術(shù)檢測鞏膜MMP-2和TIMP-2mRNA及蛋白表達(dá)，構(gòu)建BDNF和TGF-β2基因真核表達(dá)載體，經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染入豚鼠玻璃體。熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)，RT-PCR檢測BDNF與T

2、GF-β2mRNA的表達(dá)。以探討形覺剝奪性近視的發(fā)生機(jī)制，為近視治療的研究提供一條新的思路。 結(jié)論:　　1.應(yīng)用半透明眼罩單眼遮蓋8周建立了哺乳動物豚鼠形覺剝奪性近視模型?！　?.單眼遮蓋可造成遮蓋眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層的BDNF蛋白表達(dá)減少，遮蓋眼視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜BDNFmRNA表達(dá)減少。鞏膜未檢測到BDNF表達(dá)。提示BDNF參與FDM形成?！　?.單眼遮蓋可造成遮蓋眼視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞外節(jié)TGF-β2蛋白表達(dá)減少。

3、遮蓋眼視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜及鞏膜TGF-β2mRNA表達(dá)減少。提示TGF-β2參與FDM形成?！　?.單眼遮蓋可造成遮蓋眼鞏膜MMP-2mRNA及蛋白表達(dá)增多，TIMP-2mRNA及蛋白表達(dá)減少。提示MMP-2/TIMP-2的平衡失調(diào)參與FDM眼鞏膜ECM重塑?！　?.成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pEGFP-C3-BDNF、pEGFP-N3-TGF-β2。　　6.脂質(zhì)體介導(dǎo)真核表達(dá)載體pEGFP-C3-BDNF、pEGFP-N3-TGF-β2