腦源性神經(jīng)生長因子在唾液腺腺樣囊性癌神經(jīng)侵襲和轉(zhuǎn)移中作用的相關(guān)研究.pdf

1、目的： 以SACC臨床標(biāo)本和SACC細胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移株ACC-M作為研究腫瘤轉(zhuǎn)移分子機制的模型，旨在通過一系列體外、體內(nèi)實驗觀察腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)與SACC神經(jīng)侵襲特性的關(guān)系以及BDNF對SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力、體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法： 1.以30例SACC標(biāo)本為研究對象，以5例正常腮腺及3例腺泡細胞癌作為對照，采用免疫組化法對BDNF和TrkB進行檢測。以SACC高低轉(zhuǎn)移細

2、胞系A(chǔ)CC-2和ACC-M為研究對象，利用免疫組化、RT-PCR、實時熒光定量PCR和Western印跡檢測BDNF和TrkB在其中的表達差異。 2.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉(zhuǎn)移細胞系A(chǔ)CC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對象，利用MTT、懸浮培養(yǎng)、流式細胞儀、軟瓊脂克隆形成實驗觀察BDNF對SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力和體外侵襲能力的影響。 3.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉(zhuǎn)移

3、細胞系A(chǔ)CC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對象，利用裸鼠建立涎腺腺樣囊性癌體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型，觀察BDNF在涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移過程中的作用。 結(jié)果： 1.組織標(biāo)本免疫組化顯示TrkB表達水平在嗜神經(jīng)現(xiàn)象組顯著高于未見嗜神經(jīng)現(xiàn)象組(P<0.05)，BDNF表達水平與嗜神經(jīng)現(xiàn)象無關(guān)(P>0.05)。實時熒光定量PCR和Western印跡均檢測到BDNF和TrkB在ACC-M中的表達高于ACC-2(P<0.0

4、1)。 2.ACC-2和ACC-M在體外培養(yǎng)過程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25ng/ml，50ng/ml，100ng/mlBDNF對ACC-2和ACC-M增值均無明顯影響(P>0.05)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2和ACC-M的體外侵襲能力(P<0.01)

5、 3.ACC-M裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力顯著高于ACC-2的裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力，ACC-2和ACC-M在轉(zhuǎn)移能力上存在差異。實驗組(ACC-2+100ng/ml BDNF)與對照組(ACC-2)相比較，雖然在成瘤面積和所占比例上略高，但其差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.TrkB的表達強度與SACC的神經(jīng)侵襲特性相關(guān)。BDNF和TrkB的表達強度與SACC的高轉(zhuǎn)移特性相關(guān)。 2.SACC的轉(zhuǎn)移特性與抗失巢凋亡能力相