腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF和TrkB在朊病毒中的作用研究.pdf

1、目的：
　　朊病毒?。ㄓ址Q可傳播性海綿狀腦病，TSEs）是一種能夠感染人和其他多種哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，它典型的神經(jīng)病理學(xué)特征主要有腦組織中出現(xiàn)海綿狀空泡樣變性、淀粉樣斑塊沉積、神經(jīng)元丟失和星形膠質(zhì)細胞增生。BDNF是具有防止神經(jīng)元死亡功能的特殊蛋白質(zhì)，BDNF及其受體TrkB在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，對神經(jīng)元的成長、發(fā)育、分化和機體損傷修復(fù)都具有重要的作用。為了探討B(tài)DNF和TrkB在朊病毒病中可能的變化，我們以朊病毒株—

2、羊瘙癢因子263K顱內(nèi)感染的倉鼠腦組織以及朊病毒穩(wěn)定感染的細胞系作為研究對象，以觀察BDNF和TrkB在朊病毒感染期間的表達變化，并深入探討其可能發(fā)揮的作用。
　　方法：
　?。?）顱內(nèi)接種羊瘙癢因子263K感染的倉鼠終末期（80天）腦組織、接種后感染期第0天、20天、40天、60天和80天的倉鼠腦組織以及朊病毒感染的細胞系SMB-S15細胞中，采用Western Blot方法和免疫組織化學(xué)方法檢測BDNF和TrkB蛋白的表

3、達水平變化。
　?。?）進一步研究BDNF和TrkB與神經(jīng)元及PrPSc在感染朊病毒的腦組織和細胞中是否存在作用關(guān)系，利用免疫熒光化學(xué)雙重染色法檢測BDNF和TrkB在倉鼠腦組織中的表達分布變化。
　?。?）應(yīng)用Western Blot和免疫組織化學(xué)方法檢測顱內(nèi)接種羊瘙癢因子263K感染的倉鼠終末期（80天）腦組織、接種后感染期第0天、20天、40天、60天和80天的倉鼠腦組織、朊病毒感染的細胞系SMB-S15細胞中BDNF

4、下游作用分子p-TrkB、GRB2和p75NTR的表達水平變化，探討B(tài)DNF在朊病毒病中的相關(guān)作用機制，探索BDNF-TrkB信號通路的改變在朊病毒病中的作用。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)Western Blot方法檢測顯示結(jié)果，首次提出了在可傳播性海綿狀腦病終末期BDNF和TrkB以及下游的作用分子的表達量均顯著降低，提示BDNF可能參與TSEs的發(fā)病。免疫熒光結(jié)果顯示BDNF主要與神經(jīng)元細胞共定位表達，與星形膠質(zhì)細胞不表達。倉鼠

5、接種感染期不同時間點腦組織樣本中BDNF表達量隨感染時間延長而逐漸下降，而相互作用的受體TrkB，尤其是磷酸化的TrkB（p-TrkB）隨著時間的依賴性也均有遞減的下降趨勢，這樣的下降趨勢與神經(jīng)元的丟失類似。相反，與在體內(nèi)試驗結(jié)果不同的是，BDNF和TrkB及其下游的作用分子在朊病毒感染的細胞系SMB-S15細胞及其治愈型正常表達細胞系SMB-PS細胞中的表達量相比并無顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，我們通過West