基因修飾神經(jīng)干細胞移植治療PD的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文基因修飾神經(jīng)干細胞移植治療PD的實驗研究姓名：陰金波申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（神經(jīng)外科）指導教師：張可成;周政2002.5.1目前的技術均無法將N S C s 完全地、特異性地誘導分化為多巴胺能神經(jīng)元，因此治療作用非常有限。為了提高移植的治療效果，我們設想，在體外用T H 基因轉(zhuǎn)染N S C s 然后移植入腦，利用N S C s 自身的修復和治療基因的雙重作用，可以起到更好的治療效果。目前還未見此方面的報道

2、。j 、，青天+ 據(jù)弛，腳應用D N A 重組技術、細胞培養(yǎng)技術、腦移植技術等方法，制備T H 基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體，感染N S C s 后，再將表達T H 的N S C s移植入P D 大鼠紋狀體內(nèi)，以觀察是否對P D 起一定的治療作用，并比較與單純N S C s 移植的療效差異，，實驗結果如下：1 ．包裝N 2 A T H 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體并鑒定其在靶細胞中成功表達2 ．分離、鑒定孕1 6 天( E m b r y n o i

3、 c d a y1 6 ，E 1 6 ) W i s t a r 大鼠中腦N S C s 。3 ．病毒上清感染N S C s 后，成功表達T H ，N S C s 在分化為成熟細胞后仍能繼續(xù)表達T H 。4 ．將N S C s 、N S C s ／T H 移植入P D 大鼠患側紋狀體內(nèi)，術后在不同時間內(nèi)檢測P D 大鼠旋轉(zhuǎn)行為的變化。發(fā)現(xiàn)N S C s 、N S C “T H 移植組旋轉(zhuǎn)行為均有改善，但N S C s ／T H 移植組改

4、善更為明顯，持續(xù)時間更長。5 ．術后1 、2 、4 月H P L C ．E C 檢測移植區(qū)D A 及D O P A C 的含量有所增加，表明移植細胞在局部已釋放D A ，促進了P D 大鼠癥狀的改善，以N S C s ／T H 移植組D A 增加更為明顯，表明T H 基因轉(zhuǎn)染的N S C s 移植比單純N S C s 移植具有更好的療效?？傊?，本實驗成功地進行了N S C s 的分離、鑒定及體外培養(yǎng)，并完成了重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體N 2 A