基因修飾神經干細胞移植治療PD的實驗研究.pdf_第1頁
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1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文基因修飾神經干細胞移植治療PD的實驗研究姓名:陰金波申請學位級別:碩士專業(yè):外科學(神經外科)指導教師:張可成;周政2002.5.1目前的技術均無法將N S C s 完全地、特異性地誘導分化為多巴胺能神經元,因此治療作用非常有限。為了提高移植的治療效果,我們設想,在體外用T H 基因轉染N S C s 然后移植入腦,利用N S C s 自身的修復和治療基因的雙重作用,可以起到更好的治療效果。目前還未見此方面的報道

2、。j 、,青天+ 據(jù)弛,腳應用D N A 重組技術、細胞培養(yǎng)技術、腦移植技術等方法,制備T H 基因的逆轉錄病毒表達載體,感染N S C s 后,再將表達T H 的N S C s移植入P D 大鼠紋狀體內,以觀察是否對P D 起一定的治療作用,并比較與單純N S C s 移植的療效差異,,實驗結果如下:1 .包裝N 2 A T H 逆轉錄病毒表達載體并鑒定其在靶細胞中成功表達2 .分離、鑒定孕1 6 天( E m b r y n o i

3、 c d a y1 6 ,E 1 6 ) W i s t a r 大鼠中腦N S C s 。3 .病毒上清感染N S C s 后,成功表達T H ,N S C s 在分化為成熟細胞后仍能繼續(xù)表達T H 。4 .將N S C s 、N S C s /T H 移植入P D 大鼠患側紋狀體內,術后在不同時間內檢測P D 大鼠旋轉行為的變化。發(fā)現(xiàn)N S C s 、N S C “T H 移植組旋轉行為均有改善,但N S C s /T H 移植組改

4、善更為明顯,持續(xù)時間更長。5 .術后1 、2 、4 月H P L C .E C 檢測移植區(qū)D A 及D O P A C 的含量有所增加,表明移植細胞在局部已釋放D A ,促進了P D 大鼠癥狀的改善,以N S C s /T H 移植組D A 增加更為明顯,表明T H 基因轉染的N S C s 移植比單純N S C s 移植具有更好的療效??傊?,本實驗成功地進行了N S C s 的分離、鑒定及體外培養(yǎng),并完成了重組逆轉錄病毒載體N 2 A

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