豬源2009甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其致病性的研究.pdf

1、2009年3月新甲型H1N1流感病毒在墨西哥暴發(fā)，同年4月第1株2009甲型H1N1流感病毒被分離，之后有越來越多的報道表明2009甲型H1N1流感病毒可以由人向豬傳播。研究證明，2009甲型H1N1流感病毒是混合了豬源流感病毒、禽源流感病毒和人源流感病毒三者特征的重組病毒，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經濟損失，也對人類的健康構成威脅。因此對豬群中H1N1流感病毒進行流行病學調查和監(jiān)測具有重要的公共衛(wèi)生意義。本實驗從2013年1月～2014年12月

2、對廣西省部分養(yǎng)豬場及發(fā)病豬群進行樣品采集和病毒的分離，目的為研究該區(qū)域豬群中流行的流感病毒亞型、變異規(guī)律和發(fā)病情況，為豬流感的研究和防控提供參考。實驗成果如下:
　　1.從發(fā)病豬群分離鑒定得到12株H1N1亞型豬流感病毒，其中1株為2009甲型H1N1流感病毒。本研究從2013年1月～2014年12月采集至廣西8個市（地區(qū)）發(fā)病豬群的豬組織病料共1609份進行病毒分離。經9～11日齡SPF雞胚分離得到12株豬流感病毒株。運用RT-

3、PCR的方法對12株病毒的HA和NA基因進行擴增和序列測定分析，鑒定12株病毒均為H1N1亞型，其中1株為2009甲型H1N1流感病毒。將這株豬源2009甲型H1N1流感病毒株作為本實驗研究的對象，并命名為A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1)。
　　2.遺傳進化分析表明分離株8個基因片段與其他2009甲型H1N1流感病毒的進化關系一致。對A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1)全基因組的8個

4、基因片段進行RT-PCR擴增、克隆及序列測定，運用MegAlign軟件進行核苷酸和氨基酸的比較分析，再通過MEGA5.0軟件構建遺傳進化樹。進化分析結果表明分離株與2009甲型H1N1流感毒株處于同一個進化枝，與A/California/04/2009(H1N1)親緣關系很近，起源于同一祖先。其基因來源情況為:HA、NS和NP基因來源于古典型H1N1豬源譜系，NA和M基因來源于類禽型H1N1豬源譜系，PA和PB2基因來源于禽源譜系，PB