角蛋白17(K17)作為自身抗原在銀屑病發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、銀屑病是一種常見的，易反復發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病，是Th1/Th17細胞共同介導的自身免疫紊亂。白介素17(IL-17)是輔助性T細胞亞群之一Th17細胞分泌的主要細胞因子，在銀屑病的發(fā)病中占有重要的地位，它和IFN-γ都被認為是“銀屑病的關鍵細胞因子”。IL-17信號轉導機制包括3條途徑：JAK/STAT、NF-κB和MAPK，其中，JAK/STAT與銀屑病角質形成細胞（KC）關系密切。角蛋白17（K17）是“銀屑病相關性細胞角蛋白”

2、，與鏈球菌M蛋白具有相同的序列ALEEAN，可特異刺激銀屑病T細胞，使之活化、釋放IFN-γ等炎癥因子，而IFN-γ又能夠經STAT1信號通路上調K17的表達，使機體產生針對K17的自身免疫反應，從而形成了一個惡性環(huán)路，導致炎癥反應和KC異常增生等病理改變，成為銀屑病發(fā)病過程中的關鍵環(huán)節(jié)。因K17在銀屑病皮損的高表達以及其具有刺激T細胞活化的作用，被界定為銀屑病自身反應性T細胞識別的候選靶抗原。我們以往的研究已經證明在銀屑病的病理過程中

3、存在“K17—T細胞─細胞因子環(huán)路”，該環(huán)路可能是銀屑病皮損持續(xù)存在和反復發(fā)作的重要基礎。
　　本研究在此基礎上首次提出并驗證IL-17是該環(huán)路中的重要細胞因子成員，觀察IL-17誘導表皮角質形成細胞(KC)表達K17的作用及其調控的信號轉導機制，進一步深入探討K17作為自身抗原在銀屑病發(fā)病過程中的意義，從而加深對銀屑病發(fā)病機理的認識，并為銀屑病的治療提供新的思路。
　　主要實驗方法及結果如下：
　　1）使用DMEM/

4、10％FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)HaCaT細胞；
　　2）以10U/mL、50U/mL、250U/mL和500U/mL的IL-17分別作用于培養(yǎng)的HaCaT細胞，以IFN-γ處理的HaCaT細胞為陽性對照，不施加任何干預的HaCaT細胞作為空白對照。培養(yǎng)24～72小時后收獲細胞，并分別提取RNA和蛋白質用于K17表達水平的檢測；
　　3）用實時熒光定量RT-PCR、ELISA、Westernblot、共聚焦免疫熒光等方法從mRNA和蛋

5、白水平測定K17的表達水平，篩選IL-17誘導K17表達的最佳濃度，觀察是否呈劑量依賴關系；
　　4）以篩選得出的最佳濃度的IL-17處理培養(yǎng)的HaCaT細胞；
　　5）用抗STAT1和STAT3及各自的磷酸化產物的抗體與HaCaT細胞共同孵育，ELISA、Westernblot、免疫熒光方法篩選在HaCaT細胞表達的信號分子；
　　6）未處理的HaCaT細胞分別加入相應的信號分子抑制劑Fludarabine和Pice

6、atannol孵育2小時，再加入IL-17培養(yǎng)HaCaT細胞，12～24小時后利用實時定量RT-PCR、ELISA、Westernblot、免疫熒光等方法觀察信號分子抑制劑各自對IL-17誘導K17表達的影響；
　　研究結果：IL-17以劑量依賴的方式誘導體外培養(yǎng)的HaCaT細胞表達K17，其調控K17表達的機制是經STAT1和STAT3兩個信號轉導通路實現(xiàn)的。
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)了調控K17表達的一個新的通路——IL-17