銀屑病神經(jīng)源性炎癥作用機制研究.pdf

1、銀屑病是一種病因及發(fā)病機制至今尚未闡明的常見炎癥性皮膚疾病,共存于皮損內的神經(jīng)性介質如神經(jīng)肽類可能和相關細胞因子、趨化因子、粘附分子等以協(xié)同作用方式參與了銀屑病獨特的炎癥和增生過程.近10余年的研究結果表明,神經(jīng)肽類尤其是具有血管擴張作用的神經(jīng)肽如P物質(substance P)、降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和血管活性腸肽等與銀屑病皮損的組織病理表現(xiàn)密切相關,因而,有人提出

2、神經(jīng)源性炎癥可能在其發(fā)病和病情維持過程中發(fā)揮重要作用.第一部分神經(jīng)肽CGRP誘導角質形成細胞表達神經(jīng)型一氧化氮合酶;一.目的:研究CGRP對體外培養(yǎng)KC株HaCaT細胞nNOS mRNA、蛋白表達和NO釋放的調節(jié)作用,以及其受體抑制劑CGRP-8-37對CGRP作用的影響,為探討CGRP和NO在銀屑病神經(jīng)源性炎癥中的作用提供理論依據(jù).二.方法:應用一氧化氮試劑盒(酶法)檢測體外培養(yǎng)HaCaT細胞上清液中一氧化氮水平,逆轉錄聚合酶鏈反應和

3、免疫組織化學(SP)方法檢測HaCaT細胞神經(jīng)型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表達水平.四.結論:推測銀屑病皮損內nNOS的過度表達可能與皮損內高水平的CGRP有關.CGRP誘導KC釋放的神經(jīng)型NO亦可參與皮膚神經(jīng)源性血管擴張,促進神經(jīng)源性炎癥反應.第二部分細胞因子誘導角質開成細胞表達誘生型一氧化氮合酶;一.目的:研究炎癥性細胞因子TNF-α協(xié)同IL-1β對體外培養(yǎng)KC株HaCaT細胞iNOS mRNA和蛋白表達的調節(jié)作用,以及地塞米松對

4、TNF-α協(xié)同IL-1β對體外培養(yǎng)KC株HaCaT細胞iNOS mRNA和蛋白表達的調節(jié)作用,以及地塞米松對TNF-α和IL-1β作用的影響,探討TNF-α和IL-1β在炎癥性皮膚病如銀屑病中的作用機制和地塞米松的治療效應機制.二.方法:采用逆轉錄聚合酶鏈反應方法檢測培養(yǎng)HaCaT細胞iNOS mRNA的表達,Western blotting和免疫組織化學(SP)方法檢測iNOS蛋白表達情況.四.結論:推測銀屑病皮損內iNOS的過度表達

5、可能與同時存在的高水平炎性細胞因子如TNF-α、IL-1β有關;TNFα和IL-1β可能通過上調KC表達iNOS合成釋放的NO參與皮膚免疫和炎癥反應;地塞米松對炎癥性皮膚病的治療效應可能部分與其能抑制iNOS表達有關.第三部分:一氧化氮對角質形成細胞株HaCaT增殖和凋亡的影響;一.目的:研究不同濃度梯度NO供體硝普鈉對體外培養(yǎng)KC株HaCaT增殖和凋亡的影響.二.方法:不同濃度梯度硝普鈉處理細胞后,用MTT比色分析法分析HaCaT細胞