調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的作用研究.pdf

1、在免疫學(xué)研究領(lǐng)域中免疫調(diào)節(jié)研究占據(jù)了其中重要的部分，調(diào)節(jié)性細(xì)胞對于免疫平衡和自身穩(wěn)定的維持具有重要作用。傳統(tǒng)上人們認(rèn)為B細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮正向免疫調(diào)節(jié)作用，然而最近研究發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞也具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能。1996年，Janeway等首次在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）中發(fā)現(xiàn)了具有抑制功能的B細(xì)胞的存在，1997年Bhan等在慢性結(jié)腸炎中發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞能抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，并首次提出“調(diào)節(jié)性B細(xì)胞”的概念。隨后又有研究者在多種自身免

2、疫性疾病和炎癥性疾病的小鼠模型中及在變態(tài)反應(yīng)、腫瘤免疫、抗感染免疫中都證實(shí)B細(xì)胞具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能。2008年Tedder研究組首次在小鼠脾臟中鑒定出發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞亞群，其表型為CD19+CD5+CD1dhi，主要通過分泌IL-10來發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用，并將其稱為B10細(xì)胞。
　　通過小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)B10細(xì)胞的存在和功能后，人們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)人類體內(nèi)也存在B10細(xì)胞。2009年Blair等在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)發(fā)

3、現(xiàn)了調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群的存在，其表型為CD19+CD24hiCD38hi，并發(fā)現(xiàn)同小鼠調(diào)節(jié)性B細(xì)胞一樣其負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能依賴于IL-10。2010年Yohei Iwata等在自身免疫性疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、自身免疫性皰病及多發(fā)性硬化中發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的存在，其負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的發(fā)揮依賴于IL-10。
　　銀屑病是在一定的遺傳背景與環(huán)境因素相互作用下由Th1/Th17異?；罨閷?dǎo)的自身免疫性疾病，負(fù)向免疫調(diào)

4、節(jié)功能障礙在其發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，但其確切的細(xì)胞和分子機(jī)制尚不明確。銀屑病發(fā)病過程不僅存在CD4+CD25+Treg數(shù)量和功能異常而且伴有IL-10水平的變化。小鼠研究發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞能夠影響Treg的發(fā)育和功能，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的部分負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能是通過CD4+CD25+Treg實(shí)現(xiàn)的。這些均提示著調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可能參與了銀屑病的發(fā)病并發(fā)揮著重要的負(fù)向調(diào)控作用。
　　本研究比較分析了銀屑病患者外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的數(shù)量、表型及功能，對調(diào)

5、節(jié)性B細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的可能作用進(jìn)行了初步的分析。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.銀屑病患者外周血B10細(xì)胞分析：收集銀屑病患者外周血，分離
　　PBMC，給予CpG+CD40L刺激，并加入PIB（P為PMA，I為離子霉素，B為Brefeldin A Solution，前兩者刺激細(xì)胞因子合成，后者抑制細(xì)胞因子分泌），進(jìn)行5h培養(yǎng)，收集細(xì)胞，標(biāo)記CD19及胞內(nèi)IL-10，以流式細(xì)胞儀檢測分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：銀屑病患者外周血IL

6、-10+B細(xì)胞比例均數(shù)降低，但整體與正常對照間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.銀屑病患者外周血B10前體細(xì)胞分析：收集患者外周血，分離PBMC，加入CpG+CD40L刺激，并加入PIB，進(jìn)行48h培養(yǎng)，收集細(xì)胞，標(biāo)記CD19及胞內(nèi)IL-10，以流式細(xì)胞儀檢測分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：銀屑病患者外周血IL-10+B細(xì)胞比例與正常對照相比明顯升高，表明B10前體細(xì)胞數(shù)量增多。
　　3.銀屑病患者外周血B10細(xì)胞分化能力分析：對比分析銀屑病患者與正

7、常人外周血在不同刺激條件下培養(yǎng)48小時后的B10細(xì)胞比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血在體外刺激培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的B10細(xì)胞占 B細(xì)胞總數(shù)的比例與正常人比較沒有差異，表明B10細(xì)胞體外刺激條件下不存在分化障礙。
　　4.治療后銀屑病患者外周血B10前體細(xì)胞比例分析：收集同一患者治療前后外周血，分離PBMC，同上四組刺激后收集細(xì)胞標(biāo)記CD19及胞內(nèi)IL-10，以流式細(xì)胞儀檢測分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療后銀屑病患者外周血B10前體細(xì)胞數(shù)明顯低于治療

8、前。
　　5.銀屑病患者B10細(xì)胞表型分析：收集銀屑病患者及正常人外周血，分離 PBMC，同上四組刺激后收集細(xì)胞標(biāo)記 CD19、CD38、CD24。以流式細(xì)胞儀檢測分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在PIB基礎(chǔ)刺激或者CD40L及CpG單獨(dú)刺激時分泌IL10的B細(xì)胞主要位于CD24hi CD38low或CD24hi CD38-區(qū)域，而在PIB+CD40L+CpG時B細(xì)胞所分泌IL10增加且主要位于CD24hiCD38hi區(qū)域。
　　6.銀屑病患

9、者外周血B10細(xì)胞功能分析：收集銀屑病患者及正常人外周血，分離PBMC，表面標(biāo)記 CD19、CD38、CD24。流式細(xì)胞儀分選CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞及除外CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞的其他細(xì)胞。將含有CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞和不含有CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞的PBMC分別置于預(yù)先包被抗CD3抗體的24孔板培養(yǎng)72h，于最后6h加入P+I刺激，收集上清，ELISA檢測IFN–γ和