三株雞傳染性喉氣管炎病毒的部分基因序列及免疫原性分析.pdf

1、雞傳染性喉氣管炎(Avian Infectious Laryngotracheitis，AILT)是由傳染性喉氣管炎病毒引起的一種急性、接觸性上部呼吸道傳染病。其特征是呼吸困難、咳嗽和咳出含有血樣的滲出物。剖檢時可見喉部、氣管粘膜腫脹、出血和糜爛。在病的早期患部細胞可形成核內包涵體。本病1925年在美國首次報道后，現已遍及世界許多養(yǎng)雞地區(qū)。本病傳播快，死亡率較高，在中國較多地區(qū)發(fā)生和流行，危害養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。雞傳染性喉氣管炎是第一個通過有

2、效疫苗免疫接種獲得防控的傳染病。常用于預防和控制ILT的疫苗為弱毒活ILT疫苗，但該疫苗可引起潛伏感染，并且在雞群與雞群的傳播過程中病毒毒力增強返祖，安全性差，容易引起發(fā)病所以存在很大的應用限制。本實驗主要對三株雞傳染性喉氣管炎病毒分離株的部分基因及免疫原性進行分析，從而為雞傳染性喉氣管炎疫苗的研究提供一定的參考資料。
　　首先對三株疑似雞傳染性喉氣管炎病毒進行分離和初步鑒定，以雞胚絨毛尿囊膜(CAM)接種法接種SPF雞胚并觀察其

3、培養(yǎng)特性，收集絨毛尿囊膜及尿囊液，提取基因組DNA，然后根據GenBank發(fā)表的雞傳染性喉氣管炎病毒gB、gC、gD、gG基因保守序列設計4對引物對其基因組DNA進行普通PCR擴增，以及膠回收-連接-克隆-序列測定，序列分析表明，獲得的核苷酸序列與GenBank發(fā)表的序列相似性均在99％以上，存在很高的同源性。
　　其次對這三株病毒進行免疫原性分析，病毒株感染的絨毛尿囊膜凍融后的上清和尿囊液混合喉內接種試驗雞，同時ILTV商品弱毒

4、疫苗經點眼滴鼻途徑免疫試驗雞，并設置非免疫對照雞組。分別于免疫后7d、14d、21d采血分離淋巴細胞，進行RNA提取與反轉錄，采用相對熒光定量PCR方法（選擇β-actin基因為內參，采用SYBRGreen染料法）檢測IL-2、IL-6的表達量變化。建立標準曲線和分析熔解曲線。并于免疫后21天用ILTV強毒感染所有試驗雞，于28d、35d采血檢測IL-2、IL-6的表達量變化及統(tǒng)計各組的免疫保護率。結果顯示，各基因的CT值檢測范圍在15