米曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)蛋白酶的條件優(yōu)化及酶的性質(zhì)研究.pdf

1、米曲霉(Aspergillus oryzae)是生產(chǎn)堿性蛋白酶的優(yōu)良菌株之一。利用Plackett-Burman、Box-Behnken等實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，本研究對米曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)堿性蛋白酶的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對該堿性蛋白酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究。該研究對堿性蛋白酶的研究和應(yīng)用有一定的實(shí)際意義。主要內(nèi)容如下： 通過比較四株菌對豬血蛋白降解能力的強(qiáng)弱，證明米曲霉3.381是優(yōu)良的豬血發(fā)酵菌，并且在發(fā)酵過程中，米曲霉3.381分泌

2、的堿性蛋白酶是豬血蛋白水解的主要因素。且該菌對血清蛋白的降解程度高于對血細(xì)胞蛋白的降解程度。 以白蛋白為底物，對蛋白酶檢測方法進(jìn)行了改進(jìn)，結(jié)果表明：改進(jìn)方法符合動(dòng)力學(xué)法測定酶活力的原理；改進(jìn)方法可以更有效的反映蛋白酶對血漿蛋白水解能力的強(qiáng)弱。通過Plackett-Burman、Box-Behnken等實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法確定米曲霉3.381產(chǎn)堿性蛋白酶的優(yōu)化培養(yǎng)基，配方為：溶液與麩皮比例1：1、MGSO<,4>0.25％、硫酸銨2.0％

3、、葡萄糖2％、吐溫80 0.5％、NaCl 0.2％、KH<,2>PO<,4>0.02％。優(yōu)化后培養(yǎng)基的產(chǎn)量是216.56U/g，比基礎(chǔ)培養(yǎng)基提高2.5倍。通過對培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，證明菌種傳代次數(shù)為1-3次、接種量5％、自然pH、發(fā)酵溫度為30℃、產(chǎn)酶收獲時(shí)間72h-84h更適合酶的生產(chǎn)。 通過對分離得到的堿性蛋白酶的性質(zhì)研究證明：該酶的最適pH為9.0；最適作用溫度為50℃；具有良好的熱穩(wěn)定性，50℃保溫120min仍然保持了