米曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)蛋白酶的條件優(yōu)化及酶的性質研究.pdf

1、米曲霉(Aspergillus oryzae)是生產(chǎn)堿性蛋白酶的優(yōu)良菌株之一。利用Plackett-Burman、Box-Behnken等實驗設計方法，本研究對米曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)堿性蛋白酶的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，并對該堿性蛋白酶的性質進行了研究。該研究對堿性蛋白酶的研究和應用有一定的實際意義。主要內容如下： 通過比較四株菌對豬血蛋白降解能力的強弱，證明米曲霉3.381是優(yōu)良的豬血發(fā)酵菌，并且在發(fā)酵過程中，米曲霉3.381分泌

2、的堿性蛋白酶是豬血蛋白水解的主要因素。且該菌對血清蛋白的降解程度高于對血細胞蛋白的降解程度。 以白蛋白為底物，對蛋白酶檢測方法進行了改進，結果表明：改進方法符合動力學法測定酶活力的原理；改進方法可以更有效的反映蛋白酶對血漿蛋白水解能力的強弱。通過Plackett-Burman、Box-Behnken等實驗設計方法確定米曲霉3.381產(chǎn)堿性蛋白酶的優(yōu)化培養(yǎng)基，配方為：溶液與麩皮比例1：1、MGSO<,4>0.25％、硫酸銨2.0％

3、、葡萄糖2％、吐溫80 0.5％、NaCl 0.2％、KH<,2>PO<,4>0.02％。優(yōu)化后培養(yǎng)基的產(chǎn)量是216.56U/g，比基礎培養(yǎng)基提高2.5倍。通過對培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，證明菌種傳代次數(shù)為1-3次、接種量5％、自然pH、發(fā)酵溫度為30℃、產(chǎn)酶收獲時間72h-84h更適合酶的生產(chǎn)。 通過對分離得到的堿性蛋白酶的性質研究證明：該酶的最適pH為9.0；最適作用溫度為50℃；具有良好的熱穩(wěn)定性，50℃保溫120min仍然保持了