金橙黃微小桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本研究室以往從腐敗的堿性硅溶膠中分離出一株金橙黃微小桿菌EX0。本研究對該菌株產(chǎn)生堿性蛋白酶的能力、產(chǎn)酶條件、及其酶學(xué)性質(zhì)進行了研究,為探索新的堿性蛋白酶來源及其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供了依據(jù)。
　　利用酪蛋白培養(yǎng)基進行篩選,發(fā)現(xiàn)該菌株有水解酪蛋白的能力,表明其有產(chǎn)生蛋白酶的能力,產(chǎn)量為13.361U/mL。之后采用了單因素試驗和正交實驗的方法,對金橙黃微小桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶條件進行優(yōu)化,以及福林法測定不同條件下堿性蛋白酶活力。實驗結(jié)果顯示培

2、養(yǎng)基最佳組成成分為酵母膏10g/L,玉米粉10g/L，NaCl5g/L,最優(yōu)發(fā)酵條件為碳氮比為1:1,溫度為25℃,培養(yǎng)時間21h,最佳接種量為8％,最佳培養(yǎng)基初始pH為8.8。優(yōu)化后其產(chǎn)酶量能夠達到37.793U/mL。
　　該實驗利用不同飽和度的硫酸銨進行沉淀,得到最佳的硫酸銨飽和度為50%。將濃縮后的酶液通過葡聚糖凝膠層析,經(jīng)分離純化后,金橙黃微小桿菌分泌的堿性蛋白酶分子量大小約42KDa,不同濃度的EDTA和β-巰基乙醇均

3、對該蛋白酶有不同程度的抑制作用,EDTA對蛋白酶的抑制作用,說明該酶可能含有金屬離子。該酶反應(yīng)的最適溫度為50℃,反應(yīng)的最適pH為8.0。金屬離子如Cu2+、Zn2+、Mn2+,對酶活性表現(xiàn)出強烈抑制作用,Mg2+對酶表現(xiàn)出一定的激活作用。
　　近年來對堿性蛋白酶的研究主要來源于地衣芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌等芽孢桿菌屬,對于其他種屬的微生物是否能夠產(chǎn)生具有工業(yè)價值的堿性蛋白酶還有待進一步探索。腐敗的堿性硅溶膠中營養(yǎng)成分不高,且屬于高