Angiopoietin在原發(fā)性肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移中的作用初步研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文Angiopoietin在原發(fā)性肝癌血管生成和轉(zhuǎn)移中的作用初步研究姓名：彭林申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：裘法祖2001.4.1華中科技夫掌罔濟匪掌霸B翻l士掌位詫’文f本研究選擇本身不表達Angiopoietin的肝癌細胞系SM赫C7721，通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將Angiopoietin基因?qū)隨MMC7721肝癌細胞系，并用G418篩選穩(wěn)定表達的細胞克隆，成功構(gòu)建了攜帶Angiop

2、oietin基因并穩(wěn)定表達的SMMC772l肝癌細胞系。用RTPCR方法從RNA水平以及用免疫熒光法從蛋白水平均可以證實新構(gòu)建的肝癌細胞系攜帶了Angiopoietin基因并能穩(wěn)定表達其蛋白產(chǎn)物。由于Angiopoietin的Tie2受體是血管內(nèi)皮細胞特異性分布的，有必要了解攜帶Angiopoietin基因的肝癌細胞和血管內(nèi)皮細胞之間的相互作用。通過SMMC7721肝癌細胞對臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(采用原代培養(yǎng)23代之細胞)的小孔趨化分析實

3、驗，我們觀察到有Ang1基因表達的SMMC7721細胞對血管內(nèi)皮細胞的趨化作用比未轉(zhuǎn)染Ang1基因之前明顯增強(P005)。這表明Ang1對血管肉皮細胞有趨化作用而且這種趨化作用可以被其抗體所拮抗轉(zhuǎn)染Ang。2基因前后SMMC7721細胞對血管內(nèi)皮細胞的趨化作用沒有明顯差異(P005)。為了更好地區(qū)分正常的肝臟血管和腫瘤新生血管，我們以Walker256癌肉瘤制造原位種植肝癌模型，采用免疫組織化學(xué)染色檢測血管平滑肌激動蛋白(Smooth

4、MuscleAetin，。【SMA)作為腫瘤新生血管的特異性標志物。正常血管形態(tài)較規(guī)則，血管內(nèi)皮周圍有較多的o【SMA表達。新生血管管壁較薄，呈現(xiàn)出扭曲、折疊等不規(guī)則形態(tài)且血管內(nèi)皮周圍缺乏c【SMA表達。將轉(zhuǎn)染了Angiopoietin基因的SMMC772l肝癌細胞注射于小鼠皮下產(chǎn)生腫瘤結(jié)節(jié)，表達Ang2者腫瘤組織中新生血管的數(shù)量較未轉(zhuǎn)染前明顯增多；而表達Ang1基因者轉(zhuǎn)染前后腫瘤組織中新生血管的數(shù)量無顯著性差異。這表明Ang2的表達促