小檗堿對小鼠子宮內(nèi)膜炎的抗炎作用及機(jī)制研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜炎是奶牛最為常見的繁殖障礙性疾病，嚴(yán)重威脅著全球奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前對奶牛子宮內(nèi)膜炎行之有效且常用的方法是抗生素和激素療法，然而隨著抗生素的大量應(yīng)用，抗藥菌株不斷涌現(xiàn)，致使后期的感染更加難以治療，而且抗生素和激素的使用不可避免會(huì)造成奶中藥物殘留，給人類的健康帶來了危害。因此尋找毒副作用小且行之有效的藥物來治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，已成為現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)。中藥具有資源豐富、毒副作用小且無殘留的特點(diǎn)，因此許多國內(nèi)外的專家學(xué)者將治療奶牛

2、子宮內(nèi)膜炎的藥物由抗生素轉(zhuǎn)移到中藥上來。近幾年隨著對小檗堿及其衍生物的深入研究發(fā)現(xiàn)小檗堿具有較強(qiáng)的抗炎作用。然而小檗堿對子宮內(nèi)膜炎的作用效果和作用機(jī)制如何還未見報(bào)道。
　　奶牛作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有耗資巨大、試驗(yàn)周期長、遺傳背景不統(tǒng)一、飼養(yǎng)管理不方便等諸多缺點(diǎn)，然而，小鼠作為最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可以有效的避免上述缺點(diǎn)，且有大量的小鼠疾病模型被成功建立，因此我們選擇小鼠作為炎癥模型進(jìn)行中藥抗炎作用研究。
　　首先，本試驗(yàn)建立了小鼠子宮內(nèi)

3、膜炎模型。通過使用小鼠子宮灌注器（專利號(hào)：201410391820.8）向小鼠子宮內(nèi)灌注不同濃度的脂多糖（LPS）并在灌注后的不同時(shí)間段取小鼠子宮進(jìn)行組織切片制作和觀察，MPO、NO的活性和濃度檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在灌注LPS的濃度為2.5-5 mg/mL，灌注體積為20μL，且作用時(shí)間在24 h時(shí)，小鼠子宮組織中的MPO和NO較對照組極顯著的升高且組織切片顯示大量的炎性細(xì)胞浸潤，結(jié)果顯示小鼠子宮內(nèi)膜炎模型建立成功。
　　隨后本試驗(yàn)評(píng)估

4、了小檗堿對LPS誘導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜炎的作用效果。取60只小鼠隨機(jī)分成6組：對照組、LPS+PBS組、LPS+小檗堿（2.5、5、10 mg/kg）組、LPS+地塞米松（5 mg/kg）組，分別在LPS灌注前1 h和灌注后12 h腹腔注射給藥，灌注24 h后，取小鼠子宮進(jìn)行組織切片觀察，MPO活性測定，NO、TNF-α和IL-1β的濃度檢測。結(jié)果顯示，與LPS+PBS試驗(yàn)組相比，小檗堿可以顯著地降低MPO活性和炎性細(xì)胞的浸潤，抑制炎性細(xì)胞

5、因子TNF-α、IL-1β和NO的表達(dá)。結(jié)果表明，小檗堿能夠抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生。
　　為了探討小檗堿抗炎的作用機(jī)制，本試驗(yàn)檢測了NF-κB經(jīng)典炎癥信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白P65和IκBα的磷酸化程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小檗堿可以顯著地抑制小鼠子宮組織中P65和IκBα的磷酸化水平。結(jié)果表明，小檗堿可以抑制NF-κB信號(hào)通路的活化。
　　綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小檗堿可以通過抑制NF-κB信號(hào)通路的活化來降低炎性細(xì)胞