PARP-1活化和AIF核轉(zhuǎn)位在新生大鼠HIBD中的作用及參附注射液對其的保護作用.pdf

1、目的: 研究新生大鼠腦缺氧缺血后聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶-1（PARP-1）和凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）在腦皮質(zhì)神經(jīng)元細胞線粒體、胞質(zhì)、胞核中的動態(tài)變化，進而探討PARP-1誘導(dǎo)AIF核轉(zhuǎn)位的機制和AIF在缺氧缺血性腦損傷大鼠中的作用，同時研究參附注射液能否通過PARP-1---AIF途徑起到對新生大鼠的保護作用。
　　 方法: 新生7d SD大鼠隨機分為三組：假手術(shù)組（S）、生理鹽水對照組（C）、參附治療組（SF）。每一組按照

2、觀測的時間點不同分為3h、6h、12h、24h、3d、7d六個亞組，每個亞組8只。用Rice法制備新生大鼠HIBD模型。在每個時間點將大鼠斷頭取右側(cè)皮層腦組織勻漿行亞細胞器分離，用Western blot 方法測不同時間點亞細胞器中AIF、PARP-1動態(tài)變化；用RT-PCR的方法檢測腦皮層組織AIFmRNA；用TUNEL染色法檢測相應(yīng)時間點光鏡下腦皮層組織的凋亡細胞。
　　 結(jié)果:
　　 （1）AIF: S組各個時間點

3、的線粒體內(nèi)均有表達，且沒有量的變化，在胞漿內(nèi)有少量的表達而在胞核內(nèi)沒有表達；C組線粒體內(nèi)AIF的表達3h開始逐漸增加，6h達到高峰后開始逐漸下降，7d時與S組比較沒有差異（P>0.05）。AIF在胞漿胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)位從HI后3h開始增加，24h達到高峰后開始逐漸下降。在胞核中各個時間點AIF的表達量均明顯高于胞漿，但低于線粒體；SF組線粒體、胞漿和胞核中的表達在3h、6h、12h與對照組比較沒有差異（P>0.05），線粒體內(nèi)AIF表達在24

4、h、3d、7d SF組較C組有所增加（P<0.05），而24h胞漿和胞核中的AIF表達較C組減少,以后各個時間點均有不同程度的降低（P<0.05）。
　　 （2）PARP-1：本研究僅發(fā)現(xiàn)在胞核中有少量的表達，但在胞漿、線粒體內(nèi)無表達。
　　 （3）AIFmRNA：S組各時間點僅有少量的表達，C組從HI后3h 開始增加，24h達到高峰后下降，SF組各時間點均較C組減少（P<0.05）。
　　 （4）HI后3h C

5、 組和SF組即發(fā)現(xiàn)結(jié)扎側(cè)腦皮層有少量的凋亡細胞，隨著缺氧缺血時間的延長，凋亡細胞逐漸增多，24h達到高峰后下降； SF組在HI后24h、3d、7d均明顯低于C 組（P<0.05）。
　　 結(jié)論: HI后腦皮層組織細胞中AIF在線粒體和胞漿胞核中表達均是增加的，胞漿胞核中AIF表達高峰滯后于線粒體；HI后腦皮層組織細胞的凋亡明顯增加，且與AIF的核轉(zhuǎn)位和基因轉(zhuǎn)錄在時間上吻合；PARP-1不能轉(zhuǎn)位到胞漿和線粒體內(nèi)直接誘導(dǎo)AIF的核轉(zhuǎn)