細(xì)胞重編程因子在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及其效應(yīng).pdf

1、細(xì)胞重編程(reprogramming)是指成體細(xì)胞通過改變其分化狀態(tài),形成包括干細(xì)胞在內(nèi)的不同類型的細(xì)胞。Yamanaka和他的團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)通過過表達(dá)四種轉(zhuǎn)錄因子,皮膚細(xì)胞就能被誘導(dǎo)成多能干細(xì)胞,從而把它們命名為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(inducedpluripotentstemcells,iPS細(xì)胞或iPSCs),這四種轉(zhuǎn)錄因子因此被稱為Yamanaka因子[1]。通過直接重編程獲得的人iPSCs能夠用于組織修復(fù)和替換,這樣避免了免疫排斥和倫理

2、學(xué)問題。而且,因?yàn)檫@些細(xì)胞能夠由取自病人自身的細(xì)胞重編程獲得,所以有助于在體外建立病人自身的疾病模型和候選藥物篩選模型,這一新技術(shù)給基于干細(xì)胞的個(gè)性化治療和再生醫(yī)學(xué)帶來了光明的前景。但是,目前細(xì)胞重編程的誘導(dǎo)效率仍然很低。使用腫瘤細(xì)胞是否能夠提高重編程的誘導(dǎo)效率,以及重編程對腫瘤細(xì)胞有何影響,這些問題均有待闡明。
　　本課題通過反轉(zhuǎn)錄PCR檢測Huh7、SMMC-7721、HepG2等肝癌細(xì)胞系中四種Yamanaka因子Oct3/

3、4、Sox2、Klf4和c-Myc的mRNA水平,通過Westernblot方法檢測上述因子在蛋白質(zhì)水平的表達(dá);應(yīng)用pLenti6.3/V5Gateway慢病毒系統(tǒng),構(gòu)建Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc的慢病毒表達(dá)載體;慢病毒載體介導(dǎo)上述轉(zhuǎn)錄因子共表達(dá)于肝癌細(xì)胞系,觀察其對細(xì)胞狀態(tài)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,四種Yamanaka因子在肝癌細(xì)胞系中均有不同程度表達(dá),mRNA和蛋白質(zhì)水平的檢測結(jié)果一致;成功構(gòu)建了Yamanaka因子的

4、慢病毒表達(dá)載體,并包裝成為具有感染能力的慢病毒顆粒;慢病毒介導(dǎo)Yamanaka因子在肝癌Huh7等細(xì)胞中共表達(dá)后,獲得了iPS樣細(xì)胞。上述研究結(jié)果提示,通過過表達(dá)Yamanaka因子,腫瘤細(xì)胞有可能發(fā)生重編程,轉(zhuǎn)變?yōu)閕PS樣細(xì)胞。在這一過程中,各種Yamanaka因子的相對表達(dá)水平對于iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)非常重要,探討其中的規(guī)律,將為提高iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)效率提供理論依據(jù)。本研究為肝癌細(xì)胞來源的iPS細(xì)胞的建立,以及通過細(xì)胞重編程逆轉(zhuǎn)肝癌的惡