清肝瀉火方對Graves病大鼠炎性因子及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 采用血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌免疫純種Wistar大鼠建立GD模型，比較清肝瀉火方不同劑量之間的療效差異，探討清肝瀉火方的組方合理性，驗(yàn)證GD發(fā)病與甲狀腺炎癥反應(yīng)引起的病理損傷密不可分的假說，初步闡明GD從肝火論治的機(jī)理。為GD病辨證施治提供新思路，進(jìn)一步開發(fā)新藥物奠定理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 采用血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌免疫純種Wistar大鼠建立GD模型，再將造模后GD大鼠隨機(jī)分為五組：1模型組

2、；2中藥低劑量組；3中藥中劑量組；4中藥高劑量組；5甲巰咪唑組以及未造模的生理對照組。分別應(yīng)用清肝瀉火方大、中、小劑量組和西藥組干預(yù)治療，并運(yùn)用放射免疫分析法檢測甲狀腺激素、免疫組化法檢測核因子—κB、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈法(RT—PCR)等方法檢測細(xì)胞因子、用ELISA法檢測血清C—反應(yīng)蛋白、細(xì)胞間黏附分子和腫瘤壞死因子。 結(jié)果： 1．GD大鼠甲狀腺激素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 模型組大鼠的血清TSH明顯降低，F(xiàn)T3、FT4明顯

3、升高并與正常組有顯著性差異(P＜0.01)，提示造模成功。經(jīng)過治療后，西藥組和各中藥治療組TSH、FT3、FT4與造模組有顯著性差異(P＜0.01)，提示各治療組治療效果較好，具有明顯抗甲狀腺功能亢進(jìn)的作用。小劑量、中劑量中藥組與西藥基本相當(dāng)，而大劑量組明顯好于其他各組，有顯著性差異(P＜0.01)。 2．GD大鼠血清C—反應(yīng)蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 模型組大鼠血清CRP明顯升高、與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)，提

4、示GD的發(fā)生、發(fā)展與炎癥密切相關(guān)。小劑量、中劑量、大劑量中藥治療組CRP含量與模型組有顯著性差異(P＜0.01)。中劑量中藥組與小劑量、大劑量中藥組也存在顯著性差異(P＜0.01)，中劑量組優(yōu)于大劑量組和西藥組。這一結(jié)果提示，中藥中劑量組治療效果較好，優(yōu)于中藥大劑量組和西藥組。中藥大、中、小劑量組的血清CRP含量變化與其相應(yīng)的各組甲狀腺激素水平的變化的不同步，提示CRP含量與甲狀腺激素水平可能無相關(guān)性，CRP是否為GD病發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立因

5、素還有待于進(jìn)一步研究。 3．GD大鼠細(xì)胞間黏附分子(ICAM-1)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 模型組大鼠的血清ICAM-1含量明顯升高，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)。小劑量、中劑量、大劑量中藥治療組ICAM-1含量與造模組有顯著性差異(P＜0.01)。各中藥治療組之間無明顯差異(P＞0.05)，與西藥組亦無明顯差異(P＞0.05)，提示各治療組治療效果無差異。 4．GD大鼠甲狀腺NF—κB表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

6、 模型組大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞NF—κB表達(dá)明顯升高，與正常組有顯著性差異(P＜0.01)。病理結(jié)果顯示模型組大鼠甲狀腺細(xì)胞光密度顯著增強(qiáng)，多數(shù)陽性信號同時出現(xiàn)于胞漿和胞核中，細(xì)胞胞漿內(nèi)棕黃色顆粒堆積較多，呈片狀分布。中藥小劑量、中劑量、大劑量治療組NF—κB含量與模型組有顯著性差異(P＜0.01)。各治療組胞漿內(nèi)棕黃色顆粒堆積較分散，呈點(diǎn)狀分布，提示中藥組各個劑量組治療效果較明顯。其大劑量中藥組與小劑量、中劑量中藥組存在顯著性差異(P＜0

7、.01)，與西藥組無差異(P＞0.05)，大劑量組療效優(yōu)于小、中劑量組。 5．GD大鼠血清IL-6mRNA，IL-10mRNA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 模型組大鼠血清IL-6mRNA表達(dá)明顯升高、光帶最亮，其平均光密度OD值與正常組有顯著性差異(P＜0.01)。各個治療組的OD值均顯著下降，與模型組有顯著性差異(P＜0.01)，中劑量組與西藥組、小、大劑量組有顯著性差異(P＜0.01)，說明中劑量組療效優(yōu)于大劑量組和西藥組。

8、 模型組大鼠血清IL-10mRNA光密度值顯著降低，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)，中藥大、中、小劑量組與模型組相比有顯著性差異(P＜0.01)，中藥大劑量組與小劑量組、中劑量組、西藥組之間存在顯著性差異(P＜0.01)，中藥大劑量組療效最好。 6．GD大鼠血清TNF—α表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 造模組大鼠血清TNF—α明顯升高，與正常組有顯著性差異(P＜0.01)，小劑量、中劑量、大劑量中藥治療組TNF—α含量與模

9、型組有顯著性差異(P＜0.01)。各治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)，這一結(jié)果直接證實(shí)TNF—α參與GD免疫反應(yīng)過程，隨著疾病的控制，其含量也顯著性的降低。 結(jié)論： 1.采用大鼠尾靜脈注射小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌制作的GD模型表達(dá)出動物GD主要特征，用其進(jìn)行藥物及病理等方面的研究具有實(shí)用性。 2.中藥清肝瀉火方能夠改善甲狀腺激素水平，具有抗甲狀腺功能亢進(jìn)的作用。 3.GD大鼠模型存在炎性因子和炎性蛋白的