華重樓內(nèi)生菌抗菌肽的分離純化及其性質(zhì)研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌(Endophyte)是一類(lèi)應(yīng)用前景廣闊的資源微生物，具有固氮、促進(jìn)植物生長(zhǎng)、增強(qiáng)宿主植物抗逆性等作用，可通過(guò)組織學(xué)方法或表面消毒等方法從植物組織中分離。重樓屬植物是一類(lèi)極具藥用價(jià)值的植物，具有解毒、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗癌等功效，是許多中成藥和新藥的有效成分。隨著醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)對(duì)重樓的開(kāi)發(fā)利用，野生重樓遭到了毀滅性的人為破壞，瀕臨枯竭。藥用植物內(nèi)生菌的研究表明，其內(nèi)生菌具有合成與宿主植物相同或相似的活性成分的能力，有的內(nèi)生菌還具有促進(jìn)宿主

2、植物合成活性成分的能力。本文選擇對(duì)四川華重樓內(nèi)生菌的研究，從分離藥用植物的活性成分方面解決重樓資源不足的問(wèn)題。 通過(guò)表面滅菌，從藥用植物華重樓(Paris polyphylla var．chinensis)的地下根狀莖中分離得到82株內(nèi)生菌。通過(guò)濾紙片擴(kuò)散法初篩和平板對(duì)峙法復(fù)篩，有多株菌有抑菌活性，本文對(duì)其中一株具有較好抑制作用的內(nèi)生細(xì)菌PCE45進(jìn)行了研究。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析，確定PCE45為

3、一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。 通過(guò)硫酸銨鹽析、透析、丙酮低溫沉淀，得到PCE45的粗提液，采用管碟法測(cè)得硫酸銨最佳飽和度為50％～70％。粗提液經(jīng)SephadexG75柱、DE52纖維素柱和SephadexG25凝膠柱純化得到一種抗菌肽，命名為PCP-1。穩(wěn)定性測(cè)試表明，該抗菌肽對(duì)對(duì)蛋白酶不敏感，對(duì)高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿有較好的耐受性，可造成稻瘟病菌菌絲畸形并抑制孢子萌發(fā)。抑菌譜表明該抗菌肽對(duì)玉米彎胞病菌等