乳鐵蛋白抗菌肽的制備及分離純化.pdf

1、乳鐵蛋白是牛初乳中的一種生物活性蛋白，具有廣譜抗菌、增強鐵的傳遞與吸收、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等作用，但是其熱穩(wěn)定性很差，限制了其應用范圍。將其酶解不僅可以提高抑菌活性，還可以增強熱穩(wěn)定性，這將拓寬它在食品、醫(yī)藥、飼料等行業(yè)的應用。本課題對天然抗菌劑的開發(fā)具有重要意義。本論文主要研究了制備乳鐵蛋白抗菌肽的酶解工藝、脫鹽工藝和分離純化，并對此抗菌肽進行了抑菌性研究。 首先，研究了乳鐵蛋白抗菌肽的酶解工藝。通過單因素試驗，響應面回歸分析得

2、到酶解的最佳工藝為：采用胃蛋白酶為酶源，乳鐵蛋白濃度為30mg/mL，胃蛋白酶與乳鐵蛋白的質(zhì)量比為1.5％，溫度44℃，pH2.4，水解時間2h。優(yōu)化條件下水解度為10.76％，抑菌率為97.97％。乳鐵蛋白抗菌肽氨基酸組成分析顯示，其中疏水性氨基酸占32.90％，堿性氨基酸占19.15％。高效液相體積排阻分析發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白抗菌肽的相對分子質(zhì)量主要分布在200～6000左右。 其次，研究了DA201—C大孔吸附樹脂對乳鐵蛋白抗菌

3、肽靜態(tài)及動態(tài)脫鹽作用。通過靜態(tài)吸附實驗，得到了吸附的動力學曲線及方程、吸附等溫線和最佳洗脫劑。對于上樣濃度為10mg/mL的乳鐵蛋白抗菌肽，吸附速率方程為Y=0，5035X—0.3971(R2=0.9045)；上樣濃度為30mg/mL時，吸附速率方程為Y=0.4887X+1.0815(R2=0.9412)。平衡吸附量方程為：Qe=1.7461C—+0.5703(R2=0.9993)。最佳的洗脫劑為85％乙醇。動態(tài)吸附實驗結(jié)果表明：在采用

4、85％乙醇為洗脫劑時，DA201—C大孔吸附樹脂對乳鐵蛋白抗菌肽的脫鹽率為97.40％，乳鐵蛋白抗菌肽的回收率為92.54％。對乳鐵蛋白抗菌肽的穩(wěn)定性研究發(fā)現(xiàn)，其具有較強的耐腸道酶消化穩(wěn)定性；在酸性條件下，具有較強的熱穩(wěn)定性和貯藏穩(wěn)定性。 最后，研究了乳鐵蛋白抗菌肽的分離純化。首先通過SephadexG—50分離得到了抗菌性更強的乳鐵蛋白抗菌肽—b，該肽在1mg/mL時，對大腸桿菌的抑菌率為99.17％。然后通過半制備RP—HP