乳鐵蛋白抗菌肽的制備及分離純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乳鐵蛋白是牛初乳中的一種生物活性蛋白,具有廣譜抗菌、增強鐵的傳遞與吸收、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等作用,但是其熱穩(wěn)定性很差,限制了其應(yīng)用范圍。將其酶解不僅可以提高抑菌活性,還可以增強熱穩(wěn)定性,這將拓寬它在食品、醫(yī)藥、飼料等行業(yè)的應(yīng)用。本課題對天然抗菌劑的開發(fā)具有重要意義。本論文主要研究了制備乳鐵蛋白抗菌肽的酶解工藝、脫鹽工藝和分離純化,并對此抗菌肽進行了抑菌性研究。 首先,研究了乳鐵蛋白抗菌肽的酶解工藝。通過單因素試驗,響應(yīng)面回歸分析得

2、到酶解的最佳工藝為:采用胃蛋白酶為酶源,乳鐵蛋白濃度為30mg/mL,胃蛋白酶與乳鐵蛋白的質(zhì)量比為1.5%,溫度44℃,pH2.4,水解時間2h。優(yōu)化條件下水解度為10.76%,抑菌率為97.97%。乳鐵蛋白抗菌肽氨基酸組成分析顯示,其中疏水性氨基酸占32.90%,堿性氨基酸占19.15%。高效液相體積排阻分析發(fā)現(xiàn),乳鐵蛋白抗菌肽的相對分子質(zhì)量主要分布在200~6000左右。 其次,研究了DA201—C大孔吸附樹脂對乳鐵蛋白抗菌

3、肽靜態(tài)及動態(tài)脫鹽作用。通過靜態(tài)吸附實驗,得到了吸附的動力學(xué)曲線及方程、吸附等溫線和最佳洗脫劑。對于上樣濃度為10mg/mL的乳鐵蛋白抗菌肽,吸附速率方程為Y=0,5035X—0.3971(R2=0.9045);上樣濃度為30mg/mL時,吸附速率方程為Y=0.4887X+1.0815(R2=0.9412)。平衡吸附量方程為:Qe=1.7461C—+0.5703(R2=0.9993)。最佳的洗脫劑為85%乙醇。動態(tài)吸附實驗結(jié)果表明:在采用

4、85%乙醇為洗脫劑時,DA201—C大孔吸附樹脂對乳鐵蛋白抗菌肽的脫鹽率為97.40%,乳鐵蛋白抗菌肽的回收率為92.54%。對乳鐵蛋白抗菌肽的穩(wěn)定性研究發(fā)現(xiàn),其具有較強的耐腸道酶消化穩(wěn)定性;在酸性條件下,具有較強的熱穩(wěn)定性和貯藏穩(wěn)定性。 最后,研究了乳鐵蛋白抗菌肽的分離純化。首先通過SephadexG—50分離得到了抗菌性更強的乳鐵蛋白抗菌肽—b,該肽在1mg/mL時,對大腸桿菌的抑菌率為99.17%。然后通過半制備RP—HP

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