維生素D受體基因BsmI位點(diǎn)多態(tài)性與發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的相關(guān)性.pdf

1、目的： 發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良(Developmental dysplasia of the hip，DDH)是小兒骨科常見的肢體畸形，其發(fā)病率因地區(qū)與種族不同有很大差異，一般白種人發(fā)病率高，黑種人低，而黃種人介于兩者之間。目前，DDH病因不清，認(rèn)為是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。DDH的發(fā)生有一定的家族聚集性及遺傳傾向，但又不符合孟德爾遺傳模式，因此，是一種復(fù)雜的多基因病。 目前認(rèn)為DDH是多個(gè)微效基因和主效基因功能

2、的疊加與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，其中，遺傳因素發(fā)揮主要作用。前期，我們課題組在國家自然科學(xué)基金的資助下，對(duì)一個(gè)四代的DDH家系進(jìn)行全基因組掃描，結(jié)果支持SNP位點(diǎn)rs2254210與DDH連鎖。rs2254210位點(diǎn)位于VDR基因的第2內(nèi)含子，因此，提示維生素D受體基因(Vitamin D receptor gene，VDR)可能是DDH的易感基因。此前，已有VDR與DDH相關(guān)性的研究，但VDR基因是否是DDH的主要易感基因尚存在爭議。

3、由于DDH不同病理形態(tài)及種族人群的差異，尚不能完全排除VDR基因在我國漢族人群中作為DDH候選基因的可能性。 基于以上原因，在本研究中我們采用PCR-測序的方法，對(duì)VDR基因BsmI多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，擬通過病例-對(duì)照研究證實(shí)VDR基因是否與我國北方漢族人群DDH的發(fā)生相關(guān)，為進(jìn)一步從分子水平揭示DDH的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 材料與方法： 1、標(biāo)本來源 54個(gè)DDH患兒及55個(gè)正常兒的外周靜脈血均來自中國

4、醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院小兒骨科。所有DDH患兒均經(jīng)臨床及影像學(xué)確診，不包括畸形性髖脫位、神經(jīng)源性髖脫位及綜合征性髖脫位。正常對(duì)照組均為意外傷致骨折的兒童，有任何遺傳性疾病史者被排除在外。留取患兒及正常兒童外周靜脈血各5ml，枸椽酸鈉抗凝后-80℃深低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?2、基因型分析 應(yīng)用試劑盒提取外周血DNA。PCR擴(kuò)增SNP位點(diǎn)后測序，鑒定基因型。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 根據(jù)測序結(jié)果，直接讀取每個(gè)樣本VDR基因

5、BsmI位點(diǎn)的基因型，并計(jì)算每個(gè)等位基因頻率及基因型頻率，采用精確概率的X2檢驗(yàn)，比較病例組及對(duì)照組中等位基因及基因型頻率分布的差異。同時(shí)，采用X2檢驗(yàn)，把正常對(duì)照組與文獻(xiàn)報(bào)道的不同人群中該位點(diǎn)的等位基因或基因型頻率數(shù)據(jù)相比較，以了解VDR基因BsmI位點(diǎn)的多態(tài)性在不同種族人群中的差異。 結(jié)果： VDR基因BsmI位點(diǎn)測序結(jié)果顯示，在54例DDH患兒中檢測到了AA、AG及GG共3種基因型；在55例對(duì)照組只檢測到了AG和

6、GG基因型，未檢測到AA基因型。DDH組與對(duì)照組的基因型分布無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=1.278，P=0.527)；DDH組與對(duì)照組的等位基因頻率分布也無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=0.629，P=0.428)。 本組正常兒的VDR基因BsmI位點(diǎn)的基因型分布與美國人、澳洲人及法國人均存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，而且與中國南方漢族人的基因型分布也存在差異(P<0.05)，但與已報(bào)道的中國北方漢族人無明顯不同(P>0.05)