多指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測再生障礙性貧血免疫抑制療法療效的初步研究.pdf

1、目的：研究和評價外周血T細(xì)胞亞群、骨髓T淋巴細(xì)胞內(nèi)IFN-γ表達(dá)和Th<,1>/Th<,2>及Tc<,1>/Tc<,2>比值以及HLA-DRBl*1501表型等指標(biāo)的不同組合在再生障礙性貧血(AA)患者免疫抑制療法(IST)療效預(yù)測中的敏感度和特異度，初步確定其臨床應(yīng)用價值；研究和分析骨髓T淋巴細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色與HLA-DRBl*1501表型聯(lián)合檢測在IST療效預(yù)測中的臨床應(yīng)用價值；研究和探討建立一個以臨床、免疫學(xué)功能指標(biāo)和遺傳學(xué)指

2、標(biāo)為基礎(chǔ)的多變量再障IST療效預(yù)測模型的可行性。 方法：51例接受含環(huán)孢菌素A的IST方案治療的原發(fā)性AA患者入選，其中男性30例，女性21例：中位年齡32歲(12歲～79歲)：重型(SAA)42例(82.4﹪)，包括8例(15.7﹪)極重型(VSAA)患者，非重型(NSAA)9例(17.6﹪)；初治患者39例(76.5﹪)，既往治療過的患者12例(23.5﹪)；對IST反應(yīng)良好的患者35例(68.6﹪)，無效16例(31.4﹪

3、)：單用CsA治療的35例(68.6﹪)，CsA+ATG/ALG治療的16例(31.4﹪)，無單用．ATG/ALG治療的患者?；颊咧委熐傲魇郊?xì)胞術(shù)(FCM)檢測外周血CD3<'+>、CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞亞群、骨髓CD4<'+>和CD8<'+>細(xì)胞內(nèi)IFN-γ、IL-4以及Th<,1>/Th<,2>、Tc<,1>/Tc<,2>，經(jīng)隨訪觀察判定療效，比較不同療效反應(yīng)的患者上述各項指標(biāo)的差異，比較不同療效患者治療前后上述指

4、標(biāo)的變化，評價和比較上述免疫指標(biāo)在AA患者IST療效預(yù)測中的應(yīng)用價值。患者治療前外周血提取DNA，以PCR-SSP法檢測HLA-DRBl*1501表型，分析骨髓T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色與HLA-DRBl*1501聯(lián)合試驗與AA患者IST療效的關(guān)系，評價聯(lián)合試驗在AA患者IST療效預(yù)測中的潛在應(yīng)用價值。通過上述分析研究，選擇對患者療效反應(yīng)預(yù)測價值相對較高的免疫學(xué)和遺傳學(xué)指標(biāo)，結(jié)合反映患者病情嚴(yán)重程度的臨床指標(biāo)建立一個多變量模型，分析和探討多

5、項觀察指標(biāo)的組合在AA患者IST療效預(yù)測中的潛在應(yīng)用價值。 結(jié)論： ①本研究應(yīng)用轉(zhuǎn)譯性研究方法，對目前臨床上常用的和具有臨床應(yīng)用潛能的IST療效預(yù)測指標(biāo)進(jìn)行了研究和評價，結(jié)果證實反映患者免疫功能受損的免疫學(xué)指標(biāo)檢測是原發(fā)性AA患者IST療效預(yù)測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，不同的免疫指標(biāo)檢測在預(yù)測AA患者IST療效中的意義各不相同。FCM檢測骨髓T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ操作簡便、實用性強(qiáng)，在所評價的免疫功能指標(biāo)中，敏感性和特異性最好，特別是CD

6、8<'+>細(xì)胞內(nèi)IFN-γ定性和定量實驗對AA患者IST療效的預(yù)測價值最高。對于初治患者來說，細(xì)胞內(nèi)IFN-y染色具有很強(qiáng)的陰性排除性診斷價值，但缺點是對于占原發(fā)性AA大多數(shù)的、細(xì)胞內(nèi)IFN-~陽性的患者來說，預(yù)測價值有限。僅憑Th<,1>/Th<,2>和Tc<,1>/Tc<,2>數(shù)值的高低不能預(yù)測IST療效，但如果結(jié)合細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色的定性實驗，則可對判斷預(yù)后有重要意義，CD8<'+>細(xì)胞內(nèi)IFNw陽性且Tc<,1>/Tc<,2>

7、<50預(yù)示患者有更多的機(jī)會通過IST治療而獲得緩解，兩者的結(jié)合有助于補(bǔ)充單獨細(xì)胞內(nèi)IFN吖染色適用范圍狹窄的缺點。雖然外周血CD4<'+>和CD8<'+>細(xì)胞數(shù)量和比值及其變化與患者對IST療效反應(yīng)以及不同疾病狀態(tài)有一定聯(lián)系，但CD4<'+>/CD8<'+>倒置作為療效預(yù)測指標(biāo)缺乏必要的敏感性和特異性，缺乏臨床應(yīng)用前景。 ②骨髓T細(xì)胞內(nèi)IFN-7和HLA-DRBl*1501表型聯(lián)合檢測可以作為預(yù)測AA患者IST療效的、具有臨床實

8、用價值的一種指標(biāo)，聯(lián)合檢測能彌補(bǔ)單一HLA-DRBl*1501表型檢測靈敏度差的缺陷，并有助于提高骨髓T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ染色預(yù)測IST療效的特異度。串聯(lián)試驗陽性預(yù)測IST治療有效的準(zhǔn)確性更強(qiáng)，這對于大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)IFN-γ陽性的原發(fā)性AA患者來說有重要意義。骨髓T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ和HLA-DRBl*1501雙陽性和細(xì)胞內(nèi)IFN-γ陽性伴HLA-DRBl*1501陰性的患者都預(yù)示對IST治療有效，但前者有效的可能性高于后者。更重要的是，這兩

9、種實驗技術(shù)條件成熟，方法簡便，適合臨床快速檢驗的要求，所得到的四種檢測結(jié)果的組合能幫助臨床醫(yī)生快速地對患者治療有效的概率做出初步判斷，該聯(lián)合檢測方法為臨床提供了一種有效且方便的IST療效預(yù)測方法。 ③本研究首次提出并探討了以臨床、免疫學(xué)和遺傳學(xué)指標(biāo)為基礎(chǔ)建立一個多變量再障IST療效預(yù)測模型的可行性，這種多變量模型的建立有助于多層次地分析患者的個體差異，這種差異可能在一定程度上代表了異質(zhì)性患者某種占居主導(dǎo)地位的發(fā)病機(jī)制和遺傳學(xué)特質(zhì)