侵襲性肺曲霉病發(fā)病機(jī)制及治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①探討IPA小鼠的凝血功能異常及低分子肝素的治療作用。②評(píng)價(jià)米卡芬凈單藥及聯(lián)合兩性霉素B對(duì)小鼠IPA的治療作用。 方法：(1)凝血功能測(cè)定：72只小鼠隨機(jī)分為正常免疫非接種組(A組)、正常免疫接種組(B組)，免疫抑制非接種組(C組)、IPA模型組(D組)。煙曲霉孢子接種量為1.5×105個(gè)孢子/小鼠，接種后每24 h每組隨機(jī)取6只小鼠進(jìn)行出血時(shí)間、凝血時(shí)間、血小板計(jì)數(shù)及抗凝血酶-III(AT-III)活性測(cè)定，共3次。(2

2、)低分子肝素對(duì)IPA小鼠生存時(shí)間的影響：118只IPA模型小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(E組，n=29)、低分子肝素治療組(F組，n=30，1000 IU/kg，背部皮下注射，qd×7d)、兩性霉素B治療組(G組，n=29，1 mg/kg，腹腔注射，qd×7d)、低分子肝素加兩性霉素B治療組(H組，n=30)。治療均從接種后24h開(kāi)始。煙曲霉孢子接種量為6×105個(gè)孢子/小鼠。⑶實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為為4組：模型對(duì)照組(NS+5％ GS，A組)、米

3、卡芬凈治療組(5 mg.kg-1d-1，B組)、兩性霉素B治療組(1mg。kg-1d-1，C組)和米卡芬凈(5mg.kg-1d-1)加兩性霉素B(1mg.kg-1d-1)治療組(D組)，治療從接種第2d開(kāi)始，每d1次，共7d。(1)動(dòng)物生存期觀察：每組15-16只小鼠，接種后每天觀察1次至第21 d。共進(jìn)行2批次實(shí)驗(yàn)，分別給予2×105和6×106個(gè)孢子/小鼠。(2)肺的真菌負(fù)荷：每組9只小鼠，給予1.5×104個(gè)孢子/小鼠。治療結(jié)束后

4、取肺，勻漿后梯度稀釋培養(yǎng)，記取菌落數(shù)并計(jì)算肺的真菌負(fù)荷量。 結(jié)果：①D組接種煙曲霉孢子后24 h即出現(xiàn)血漿AT-III活性降低；48 h后出、凝血時(shí)間縮短，血漿AT-III活性較24 h時(shí)降低：72 h后出現(xiàn)明顯的血小板減少，出血時(shí)間進(jìn)一步縮短，凝血時(shí)間較48 h延長(zhǎng)，但仍低于正常，血漿AT-III活性進(jìn)一步降低；上述各指標(biāo)變化與同時(shí)間點(diǎn)其他各組比較均有顯著性差異(P<0.01)，在各時(shí)間點(diǎn)A組、B組、C組之間比較均無(wú)顯著性差異

5、。生存分析結(jié)果表明，單獨(dú)應(yīng)用低分子肝素不提高IPA小鼠21d存活率，亦不延長(zhǎng)平均生存時(shí)間。聯(lián)合應(yīng)用低分子肝素與兩性霉素B療效優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用兩性霉素B(G組與E組及F組比較，P均<0.05；H組與E組及F組比較，P均<0.01；H組與G組比較，P<0.05)。②生存分析：第1批次，米卡芬凈、兩性霉素B單藥及聯(lián)合用藥治療均能延長(zhǎng)小鼠生存期，但3種治療方案在延長(zhǎng)生存期方面差異無(wú)顯著性(B組、C組分別與A組比較均有P<0.05，D組與A組比較P<

6、0.01)。第2批次，聯(lián)合用藥組生存期長(zhǎng)于其它各組，米卡芬凈及兩性霉素B單藥治療組與模型組比較差異無(wú)顯著性(D組與A組比較P<0.01；D組分別與B組及C組比較均有P<0.05)。(2)肺的真菌負(fù)荷：兩性霉素B單藥及聯(lián)合用藥均能降低肺的真菌負(fù)荷，米卡芬凈單藥不降低肺的真菌負(fù)荷(C組與A組比較P<0.01；D組與A組比較P<0.05；B組與C組比較P<0.05；B組與D組比較P<0.01)。 結(jié)論：⑴小鼠發(fā)生IPA后可出現(xiàn)凝血功能