神經(jīng)激肽B對(duì)大鼠初情期啟動(dòng)的影響及其機(jī)理的研究.pdf

1、動(dòng)物初情期出現(xiàn)的早與遲直接關(guān)系到性成熟和以后的繁殖性能，但初情期啟動(dòng)的具體作用機(jī)制還不清楚。一般認(rèn)為與促性腺激素釋放激素（goadotropin releasing hormone，GnRH）脈沖釋放有關(guān)。研究表明神經(jīng)激肽B（neurokinin B，NKB）是一種GnRH調(diào)節(jié)因子，與初情期啟動(dòng)息息相關(guān)，被認(rèn)為是繼Kisspeptin之后的又一重要調(diào)控因子，而Kisspeptin能促進(jìn)GnRH脈沖釋放，被認(rèn)為是初情期啟動(dòng)的“看門(mén)人”（g

2、atekeeper）。近期有研究表明GnRH上有NK3R受體的表達(dá)，并且外源性的NKB及其受體激動(dòng)劑也有放大Kisspeptin的效應(yīng)，那么NKB到底是直接通過(guò)其受體作用于GnRH的脈沖釋放還是通過(guò)Kisspeptin來(lái)間接調(diào)控GnRH的分泌來(lái)進(jìn)一步調(diào)控初情期啟動(dòng)還不清楚。因此，有必要探明NKB對(duì)初情期啟動(dòng)影響的具體途徑。本試驗(yàn)以初情期啟動(dòng)前和成年雌性大鼠為研究對(duì)象，通過(guò)側(cè)腦室給予NKB、NKB拮抗劑并結(jié)合GPR54受體拮抗劑處理，觀察

3、初情期啟動(dòng)時(shí)間的變化，采用免疫熒光三標(biāo)技術(shù)檢測(cè)大鼠生殖軸上NKB、Kisspeptin和GnRH的表達(dá)變化，并結(jié)合Image-Pro Plus6.0（IPP6.0）和Image J軟件分析各組大鼠生殖軸上的平均熒光強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目，解析NKB對(duì)大鼠初情期啟動(dòng)和GnRH和Kisspeptin蛋白表達(dá)的影響。同時(shí)結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR、酶聯(lián)免疫和放射性免疫等分析方法，來(lái)闡述NKB對(duì)大鼠初情期啟動(dòng)中GnRH和Kisspeptin基因表達(dá)以及

4、對(duì)性腺激素水平的影響。
　　結(jié)果顯示：（1）初情期啟動(dòng)前NKB組、NKB+生理鹽水組、Kp-234+NKB組大鼠陰門(mén)開(kāi)啟時(shí)間顯著提前（P<0.05），卵巢重量顯著增加（P<0.05）；NKB拮抗劑組和Kp-234+生理鹽水組大鼠陰門(mén)開(kāi)啟時(shí)間明顯延遲（P<0.05）。（2）初情期啟動(dòng)時(shí)各組大鼠與陰性對(duì)照組相比，NKB組與NKB+生理鹽水組下丘腦的GnRH和Kiss-1mRNA增加（P<0.05），提示NKB促進(jìn)下丘腦GnRH和Kis

5、speptin基因的表達(dá)。（3）大鼠下丘腦不同核團(tuán)上NKB、GnRH和Kisspeptin的表達(dá)強(qiáng)度不同，NKB和Kisspeptin主要在弓狀核和室旁核表達(dá)，而GnRH主要在分布于下丘腦正中隆起和弓狀核。側(cè)腦室給予NKB后顯著增加大鼠弓狀核NKB陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目（P<0.05），正中隆起 GnRH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（P<0.05）以及弓狀核和室旁核 Kisspeptin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（P<0.05），提示NKB能夠既能促進(jìn)下丘腦GnRH和Kisspe

6、ptin的表達(dá)。（4）NKB分布于腺垂體和卵巢的間質(zhì)、顆粒細(xì)胞與卵泡膜，側(cè)腦室注射N(xiāo)KB的大鼠其垂體和卵巢上Kisspeptin的表達(dá)顯著增加說(shuō)明NKB參與垂體-性腺軸的調(diào)控。（5）初情期啟動(dòng)前的NKB拮抗劑組、陰性對(duì)照組血清中NKB平均含量顯著低于其它組（P<0.05）；NKB組和NKB+生理鹽水組血清中E2和P4的平均含量顯著高于NKB拮抗劑組和陰性對(duì)照組，提示NKB能夠增加性腺激素的分泌。
　　由以上結(jié)果得出如下結(jié)論：（1）