大豆肽對大鼠血脂代謝的影響及其抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)理研究.pdf

1、研究目的:
　　 深入研究大豆肽對血脂代謝的影響及其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)理，為新型大豆蛋白乃至生物活性肽的開發(fā)及其在食品、保健品、食品添加劑、飼料等相關(guān)行業(yè)的利用和發(fā)展提供可靠的理論依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 1.大豆肽對大鼠血脂代謝影響的量效研究
　　 (1)血脂代謝實(shí)驗(yàn)Wistar雄性大鼠，50只，體重(200±10)g，根據(jù)血清膽固醇(TC)水平及體重均衡的原則，隨機(jī)分為5組:正常對照組、高脂

2、模型組、低、中、高劑量大豆肽組。正常對照組進(jìn)食正常飼料，高脂模型組進(jìn)食高脂飼料（特制，配方見后述），低、中、高劑量組配方飼料則是在高脂飼料的基礎(chǔ)上分別加入不同劑量的大豆肽，飼養(yǎng)40天后取血測定大鼠各項(xiàng)血脂指標(biāo)。
　　 (2)攝食量及糞便排出量影響實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)期的最后3d，將大鼠移入代謝籠，單籠單只飼養(yǎng)。準(zhǔn)確記錄每只大鼠的飼料投入量、剩余量，并收集每只大鼠3d的糞便烘干待檢，稱重并計(jì)算各組大鼠攝食量及糞便排出量，比較各組不同。

3、　　 (3)體重及臟器重量影響實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)期間每周稱量一次大鼠體重，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，解剖大鼠取其肝、心、腎，稱重、計(jì)算臟體比值。肝臟冷凍（-20℃）待檢，比較各組大鼠體重、臟器重量及其系數(shù)間差異。
　　 2.大豆肽抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　 (1)脂酶與氧化型低密度脂蛋白影響實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠斷頭取足量血分離血清待測，銅試劑法測定脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)濃度，計(jì)算總脂酶（總脂酶=LPL+HL）含量;ELI

4、SA法測定肝臟組織中卵磷脂脂?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)、血清中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量，比較各組差異。
　　 (2)內(nèi)皮因子影響實(shí)驗(yàn)前述分離血清為待測樣品。ELISA法測定前列腺素(PGI2)和血栓烷A2(TXA2)及內(nèi)皮素-1（ET-1）含量;硝酸還原酶法測定內(nèi)源性一氧化氮(NO)含量，比較各組差異。
　　 (3)載脂蛋白實(shí)驗(yàn)ELISA法測定大鼠血清載脂蛋白A、B(ApoAI、ApoB)，計(jì)算兩者比值并比較各組

5、間的差異。
　　 (4)糞膽汁酸實(shí)驗(yàn)糞便烘干萃取后，循環(huán)酶法檢測其中的膽汁酸含量，比較各組間的差異。
　　 (5)離體膽固醇微膠粒形成實(shí)驗(yàn)以新鮮豬膽汁為反應(yīng)體系，向體系中加入一定量的膽固醇，除空白管外，其他分別加入不同劑量大豆肽溶液，每個(gè)劑量設(shè)置10個(gè)平行樣，一定反應(yīng)條件后測定游離膽固醇含量，以加入系統(tǒng)的膽固醇量減去沉淀中游離膽固醇量，計(jì)算膽固醇微膠粒含量。抑制率(％)=（1-含大豆肽試管中膽固醇微膠粒的含量/空白試管中

6、膽固醇微膠粒的含量）*100％
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以((x)±s)進(jìn)行表示。采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組間比較采用t檢驗(yàn);多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析(OneWayANOVA)。進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較時(shí)，若方差齊時(shí)，采用SNK檢驗(yàn)（Student-Newman-Keuls法）;若方差不齊時(shí)，采用Games-Howell檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（差異具有顯著性）。
　　

7、 結(jié)果:
　　 1.血脂代謝影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 (1)血脂代謝實(shí)驗(yàn)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，高脂模型組大鼠經(jīng)高脂飼料飼養(yǎng)后，血清TC濃度是正常對照組的1.77倍，TG為1.58倍。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，高脂模型組和正常對照組之間大鼠TC、TG水平具有顯著性差異(t＜0.01)。實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，中、高劑量組大鼠TC、TG含量均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01);HDL-C含量升高但不具有顯著性(P＞0.05)。
　　

8、 (2)攝食量及糞便排出量影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組動(dòng)物生長發(fā)育良好，活動(dòng)正常，體重穩(wěn)定增加。高脂模型組大鼠攝食量減少，但不具有顯著性(P＞0.05)，各組之間糞便排出量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (3)體重及其臟器重量影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠體重穩(wěn)定增加，從第2周末開始，中、高劑量組及正常組大鼠體重增加明顯，與高脂模型組相比，差異具有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，中、高劑量組大鼠體

9、重、肝、心、腎重量增加明顯(P＜0.05,P＜0.01)，高劑量組大鼠肝/體系數(shù)、腎/體系數(shù)偏高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01)。
　　 2.大豆肽抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 (1)實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，中、高劑量組大鼠LPL、HL、總脂酶、LCAT、內(nèi)皮源性NO、PGI2、ApoAI、糞膽汁酸含量均顯著增加（P＜0.05,P＜0.01);高劑量組ApoAI/ApoB增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

10、0.01);而中、高劑量組ox-LDL、ET-1、TXA2顯著降低（P＜0.05,P＜0.01)。各組之間ApoB無明顯差異(P＞0.05)。
　　 (2)在反應(yīng)體系中加入不同劑量大豆肽混懸液時(shí)，可以看到各管均可抑制膽固醇微膠粒形成，但各管抑制率無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.飼喂大鼠高脂飼料40天后，可誘導(dǎo)大鼠高脂模型成功。
　　 2.飼料含量為4.050％和12.150％的大豆

11、肽混懸液均可明顯降低大鼠TC、TG，并一定程度的升高大鼠HDL-C濃度，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）判定標(biāo)準(zhǔn)，大豆肽有輔助降血脂功能。
　　 3.大豆肽抗AS機(jī)制可能為:
　　 (1)增強(qiáng)血液中的脂酶及ApoAI含量，降低ApoB含量，提高體內(nèi)尤其是肝臟對脂蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)、轉(zhuǎn)化，從源頭抑制脂粒的過量沉積。
　　 (2)減少ox-LDL產(chǎn)生，從而減少泡沫細(xì)胞形成，降低血小板粘附、聚集及血栓形成，預(yù)