不同種絞股藍(lán)的RAPD分析及其抑菌作用的研究.pdf

1、以絞股藍(lán)葉片為實驗材料,采用高鹽低pH法、改良的CTAB法、改良的SDS法、高鹽沉淀法及簡易法提取基因組DNA,通過紫外分光光度計及瓊脂糖凝膠電泳檢測,表明：5種方法均能提取出絞股藍(lán)基因組DNA,提取的DNA產(chǎn)量多少依次是簡易法、高鹽沉淀法、高鹽低pH法、改良SDS法和改良CTAB法,從DNA的產(chǎn)量、質(zhì)量以及實驗耗時等方面綜合比較,高鹽低pH值法為絞股藍(lán)葉片DNA提取的最適方法。 以絞股藍(lán)基因組DNA為模板,對RAPD反應(yīng)的各組

2、成成分進(jìn)行單因子試驗,研究各成分對RAPD產(chǎn)生影響的大致濃度范圍,在單因子試驗基礎(chǔ)上,以正交組合設(shè)計實驗進(jìn)行絞股藍(lán)基因組RAPD反應(yīng)條件的優(yōu)化,以引物0.6ummol/L、dNTP濃度0.25mmol/L、Mg2+濃度2.0mmol/L、Taq酶用量1.5U、模板濃度50ng為反應(yīng)條件組合所擴(kuò)增出的條帶清晰,帶型穩(wěn)定。 在優(yōu)化的反應(yīng)條件下用不同引物對不同種絞股藍(lán)基因組DNA進(jìn)行RAPD擴(kuò)增,其中10個引物擴(kuò)增出穩(wěn)定、清晰、重復(fù)性

3、好的條帶,共擴(kuò)增出66條帶,其中55條表現(xiàn)為多態(tài)性,多態(tài)性百分率為83％,表明實驗材料種間具有豐富的遺傳多態(tài)性,在不同引物擴(kuò)增下,個別實驗材料產(chǎn)生特異性條帶,這些特異性條帶對于鑒別不同種絞股藍(lán)具有一定的價值。將擴(kuò)增圖譜中清晰、重復(fù)性好的條帶賦值后計算了種間的遺傳距離在0.3333～0.7143之間變動,利用UPGMA方法構(gòu)建遺傳聚類樹狀圖,分析種間的遺傳關(guān)系,將實驗所用的5種材料分為3類,五柱絞股藍(lán)和疏花絞股藍(lán)聚為一類、絞股藍(lán)和光葉絞股

4、藍(lán)聚為一類,201甘型絞股藍(lán)獨為一類,RAPD聚類結(jié)果和形態(tài)學(xué)分類具有一致性。 取3種類型的絞股藍(lán)進(jìn)行抑菌實驗,對不同細(xì)菌的抑制效果三種類型有一定差別,對絞股藍(lán)的抑菌物質(zhì)提取條件篩選,用兩種溶劑對絞股藍(lán)進(jìn)行抑菌組分的提取,水提取物的抑菌效果最佳,將絞股藍(lán)粗粉與水1:30混合,超聲處理40min,在60℃下浸提2h,重復(fù)提取2次,可將絞股藍(lán)中的抑菌成分基本浸提,對絞股藍(lán)在最佳浸提條件下浸提的水提取物用乙醇沉淀,得到的沉淀物對本實驗