

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:通過(guò)可四環(huán)素調(diào)控的全基因組隨機(jī)突變的方法,篩選胰腺癌健擇(GEM,Gemcitabine)耐藥的關(guān)鍵基因和遺傳通路,同時(shí)結(jié)合干細(xì)胞研究技術(shù),深入了解胰腺癌化療耐藥的分子機(jī)制及其與腫瘤干細(xì)胞之間的可能聯(lián)系,以確定新的聯(lián)合治療的靶點(diǎn),為胰腺癌提供新的治療策略。
方法:首先將含有四環(huán)素基因調(diào)控系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄激活子(transactivator,tTA)的質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1和CAPAN-1細(xì)胞中,經(jīng)
2、熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)建立可調(diào)控的Tet-off穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,再構(gòu)建含有tTA結(jié)合元件(tet Operater,tetO)的piggyBac質(zhì)粒,通過(guò)電穿孔共轉(zhuǎn)染的將piggyBac質(zhì)粒和mPB質(zhì)粒轉(zhuǎn)入Tet-off穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,通過(guò)G418藥物篩選獲得全基因組范圍內(nèi)的隨機(jī)基因突變文庫(kù)。在四環(huán)素存在或者不存在時(shí),對(duì)GEM反應(yīng)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的細(xì)胞表型,通過(guò)自連克隆法或Splinkerete PCR法進(jìn)行基因克隆及相關(guān)的功能驗(yàn)證;
3、同時(shí)結(jié)合干細(xì)胞相關(guān)技術(shù),通過(guò)piggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將四個(gè)干細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)入Tet-off穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中,誘導(dǎo)干細(xì)胞樣細(xì)胞形成,觀察其對(duì)GEM的藥物反應(yīng)的變化。
結(jié)果:建立了三個(gè)Tet-off穩(wěn)定表達(dá)且可調(diào)控的胰腺癌細(xì)胞系,即PC68-PANC1,PC248-PANC1和2D2-CAPAN-1細(xì)胞系;成功構(gòu)建了piggyBac基因搜尋載體TNO—PB,其Tet-off穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中,建立全基因組隨機(jī)基因突變文庫(kù)
4、;篩選對(duì)GEM的反應(yīng)在Dox調(diào)控下有顯著性差異的細(xì)胞克隆12個(gè),進(jìn)一步基因克隆得到初步的結(jié)果,并將克隆到的6個(gè)基因進(jìn)行染色體定位和功能分析。同時(shí)通過(guò)piggyBac轉(zhuǎn)座系統(tǒng)將攜帶四個(gè)干細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子(Oct-3/4,Sox2,c-Myc和Klf4)和tetO的目的基因成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入CAPAN-1—2D2細(xì)胞株,得到與ES和iPS細(xì)胞克隆形態(tài)相似的CAPAN-1-2D2/iPS樣細(xì)胞克隆,對(duì)CAPAN-1-2D2/iPS樣細(xì)胞克隆進(jìn)行堿
5、性磷酸酶顯色和X-gal檢測(cè),結(jié)果呈陽(yáng)性。
結(jié)論:PANC-1-PC68,PANC-1-PC248和CAPAN-1—2D2是人胰腺癌Tet-off穩(wěn)定高表達(dá)的細(xì)胞系。以此為基礎(chǔ)建立的隨機(jī)基因敲除調(diào)控技術(shù)平臺(tái)是進(jìn)行胰腺癌化療耐藥相關(guān)基因篩選行之有效的方法,我們?cè)诂F(xiàn)有基礎(chǔ)之上將擴(kuò)大突變文庫(kù)的容量,增加胰腺癌化療耐藥相關(guān)基因的篩選范圍,進(jìn)一步進(jìn)行候選基因的功能驗(yàn)證及克隆其它的GEM耐藥相關(guān)基因;通過(guò)Oct-3/4、Sox2、c-
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選胰腺癌多藥耐藥相關(guān)基因.pdf
- 應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選胰腺癌放射耐受相關(guān)基因.pdf
- 胰腺癌相關(guān)基因篩選和T-BOX2基因在胰腺癌中表達(dá)意義和信號(hào)通路的研究.pdf
- 全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)的胰腺癌易感位點(diǎn)及易感基因的功能研究.pdf
- 10649.線蟲(chóng)全基因組rnai篩選谷胱甘肽調(diào)控相關(guān)的基因
- 利用基因芯片技術(shù)研究胰腺癌相關(guān)基因.pdf
- 胰腺癌吉西他濱耐藥基因的篩選及Emodin增強(qiáng)吉西他濱治療胰腺癌的研究.pdf
- 全基因組掃描篩選德保矮馬矮小性狀相關(guān)候選基因研究.pdf
- 利用基因芯片技術(shù)研究人胰腺癌相關(guān)基因.pdf
- GPX3基因與胰腺癌化療耐藥相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選胰腺癌病人外周血單個(gè)核細(xì)胞的腫瘤相關(guān)基因.pdf
- 采用全基因組表達(dá)譜芯片篩選肺腺癌TNM分期標(biāo)志基因的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 全基因組重測(cè)序篩選山羊經(jīng)濟(jì)性狀候選基因.pdf
- 基于全基因組重測(cè)序篩選湖羊四乳頭性狀相關(guān)基因的初步研究.pdf
- 應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選乳腺癌組織耐藥相關(guān)基因.pdf
- 胰腺癌相關(guān)基因mucin4的初步研究.pdf
- 多重耐藥肺炎克雷伯菌SWU01全基因組測(cè)定及耐藥基因分析.pdf
- 體內(nèi)篩選和功能驗(yàn)證胰腺癌肺轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因.pdf
- 胰腺癌基因組不平衡性的實(shí)驗(yàn)研究及其臨床價(jià)值初探.pdf
- 通過(guò)全基因組掃描研究定位小鼠性發(fā)育相關(guān)基因.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論