胰腺癌耐藥機(jī)制初步探討.pdf

1、胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度高的腫瘤之一，預(yù)后極差。吉西他濱是胰腺癌化療的一線(xiàn)藥物，但是由于胰腺癌對(duì)吉西他濱存在先天性及獲得性耐藥，所以它效果不是很明顯。雙功能基因脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease/redox effector factor-1，APE1/Ref-1)基因具有核酸內(nèi)切酶和氧化還原兩種功能，它不僅能夠通過(guò)氧化還原功能去調(diào)控多種腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子活性，而且是DNA損傷

2、修復(fù)過(guò)程中的關(guān)鍵酶。
　　【目的】
　　1.建立胰腺癌耐藥細(xì)胞株，了解耐藥細(xì)胞株形態(tài)及特性變化，并初步探討胰腺癌耐藥機(jī)制；
　　2.探討APE1/Ref-1表達(dá)與胰腺癌耐藥機(jī)制關(guān)系。
　　【方法】
　　通過(guò)在體外對(duì)胰腺癌細(xì)胞株SW1990進(jìn)行連續(xù)藥物（吉西他濱）刺激，形成對(duì)一定濃度吉西他濱耐藥的耐藥細(xì)胞株（SW1990-0.5）；光學(xué)顯微鏡（100×）觀察SW1990-0.5形態(tài)變化；CCK-8試驗(yàn)計(jì)算SW

3、1990-0.5細(xì)胞的耐藥指數(shù)；細(xì)胞群體倍增時(shí)間試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)比較SW1990與SW1990-0.5細(xì)胞在體外增殖、侵襲、DNA損傷、細(xì)胞周期及凋亡變化；RT-PCR技術(shù)比較多藥耐藥相關(guān)基因、吉西他濱代謝相關(guān)酶基因及APE1/Ref-1 mRNA表達(dá)變化；western blotting技術(shù)比較APE1/Ref-1蛋白表達(dá)變化。
　　【結(jié)果】
　　1. SW1990-0.5的耐藥指數(shù)為（9.4

4、3±1.91）；耐藥細(xì)胞株在形態(tài)上沒(méi)有顯著改變；對(duì)于耐藥細(xì)胞株特性方面，在體外耐藥細(xì)胞株生長(zhǎng)變慢，侵襲能力以及細(xì)胞周期并沒(méi)有顯著改變，但是細(xì)胞凋亡比例明顯減少，并且細(xì)胞 DNA損傷減少；
　　2.與親本細(xì)胞比較，在RNA水平上，耐藥細(xì)胞株MRP-1，BRCP及dCK表達(dá)減少，MDR-1，RRM1及RRM2表達(dá)沒(méi)有顯著變化；
　　3.與親本細(xì)胞比較，耐藥細(xì)胞株APE1/Ref-1 mRNA及蛋白表達(dá)增加。
　　【結(jié)論】<