京亞和克瑞森葡萄轉(zhuǎn)基因再生體系建立.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)已發(fā)展成為植物育種和分子設(shè)計的一種重要手段，當前在葡萄育種中應(yīng)用的限制因子是再生體系。雖然過去有較多葡萄組織培養(yǎng)的報道，但大多采用側(cè)芽培養(yǎng)的方法，不適合轉(zhuǎn)基因再生要求。本試驗以鮮食葡萄品種京亞和克瑞森無核的成年態(tài)為試材，經(jīng)消毒、繼代擴繁后，進一步以無菌試管苗的葉片為外植體，建立了葉盤法再生的技術(shù)體系，并為轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用做了部分前期探索。得出以下結(jié)論： 1.對單芽莖段采用0.1％升汞和2％NaClO進行消毒，設(shè)計了不同消

2、毒時間的組合，實驗表明用2％NaClO消毒20min滅菌效果最好。取材在4月中旬至5月中旬污染最低。 2.初代培養(yǎng)基：京亞采用MS+6-BA1.0mg/L，克瑞森采用MS+6-BA2.0mg/L都能有效的誘導(dǎo)腋芽的萌發(fā)。 繼代增殖培養(yǎng)基：采用MS+6-BA1.5mg/L+IBA0.1mg/L可以有效的誘導(dǎo)腋芽的增殖，增殖倍數(shù)在5倍以上。 3.克服玻璃化：降低溫度、增加瓊脂含量都能夠緩解組培苗的玻璃化，但都不能完全

3、抑制玻璃化，隨著溫度的升高及繼代次數(shù)的增加，玻璃化現(xiàn)象仍然嚴重。在繼代增殖培養(yǎng)基中加入0.4mg/L的活性炭，雖然增殖倍數(shù)有所降低，但卻可以完全抑制玻璃化，同時還可以為葉盤再生提供穩(wěn)定而健壯的外植體材料。 4.葡萄葉盤再生體系：克瑞森無核的葉盤再生最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA5.0mg/L+IBA0.05mg/L，再生率為11.2％；京亞葉盤再生的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.05mg/L，再生率為65.2％