以PMI基因為選擇標(biāo)記雪柑轉(zhuǎn)基因體系的建立.pdf

1、柑桔是世界上最重要的水果之一，在我國水果產(chǎn)業(yè)中占據(jù)了重要的經(jīng)濟(jì)地位。但是因為柑桔上存在童期過長、多胚性現(xiàn)象、遺傳的高度雜合及單性結(jié)實等特點(diǎn)，利用常規(guī)育種方法受到限制，影響了育種工作的進(jìn)行。近年來，不斷完善的轉(zhuǎn)基因技術(shù)為我們提供了一種更加快速直接的育種和品種改良手段。 轉(zhuǎn)基因技術(shù)日益成為品種改良的重要手段，并為人類帶來巨大收益，但是由于目前大多使用抗生素抗性基因和抗除草劑類基因作為標(biāo)記基因，對環(huán)境和人類健康存在或潛藏著無法評估的不

2、良影響和損害，從而限制了轉(zhuǎn)基因作物在商業(yè)生產(chǎn)中的推廣利用。目前解決這一問題最有效的方法就是利用無爭議的生物安全標(biāo)記基因。 本研究以福建省優(yōu)良柑桔品種雪柑(Citrus sinensis Osb．‘Xuegan’)實生苗上胚軸為外植體，建立了高效的再生體系。構(gòu)建了6-磷酸甘露糖異構(gòu)酶(PMI)基因為選擇標(biāo)記的植物表達(dá)載體，并通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，建立了雪柑生物安全標(biāo)記PMI基因為選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，為雪柑的品種改良奠定基礎(chǔ)。主

3、要結(jié)果如下： 1) 以雪柑實生苗上胚軸為材料，建立了高效離體培養(yǎng)再生體系。上胚軸縱切結(jié)合前期暗培養(yǎng)，在MS附加BA 3mg/L、蔗糖30g/L培養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率為100％，每個外植體平均誘導(dǎo)的不定芽數(shù)達(dá)33.8；不定芽在1000mg/LIBA溶液中浸泡10 min后，移入1/4 MT(大量元素)+1/2 MT(其它元素)+10g/L蔗糖的液體培養(yǎng)基中，采用濾紙橋法進(jìn)行培養(yǎng)，生根率達(dá)100％，平均根數(shù)2.5條；移苗成活率達(dá)10

4、0％。 2)構(gòu)建了三個PMI基因為選擇標(biāo)記的植物表達(dá)載體：Ⅰ：pBIPMI，將PMI基因(manA)代替表達(dá)載體pBl121上的GuS基因；Ⅱ：pCl301PMI，用PMI基因(manA)取代pC1301上的選擇標(biāo)記基因htp；Ⅲ：pCl301PMI-LFY，將擬南芥花分生組織特性基因LFY構(gòu)建到以PMI基因(manA)為選擇標(biāo)記基因的表達(dá)載體pC1301PMI上。 3)以PMI基因為選擇標(biāo)記雪柑轉(zhuǎn)化體系的建立。經(jīng)過在含