過氧化氫對晶狀體上皮細(xì)胞增生及VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:白內(nèi)障是世界主要致盲性疾病之一。研究認(rèn)為紫外線和可見光能誘發(fā)晶狀體產(chǎn)生氧自由基，是導(dǎo)致老年性白內(nèi)障的主要因素之一。多數(shù)白內(nèi)障患者前房內(nèi)過氧化氫（H2O2）含量升高。H2O2可刺激晶狀體上皮細(xì)胞分泌一些生長因子如結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor,CTGF）、晶狀體上皮源性生長因子（lens epithelial derived growth factor,LEDGF），引起細(xì)胞生物學(xué)效

2、應(yīng)的改變。但其對晶狀體上皮細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)有無影響卻未見相關(guān)研究。研究顯示H2O2可刺激多種細(xì)胞分泌VEGF，從而發(fā)揮一定的生物學(xué)效應(yīng)。因此，本實驗的研究目的：
　　（1）觀察不同濃度的H2O2對晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響；
　?。?）研究不同濃度H2O2對晶狀體上皮細(xì)胞分泌VEGF的影響，及VEGF的分泌變化與晶狀體上皮細(xì)胞在H2O2作

3、用下的增生效應(yīng)變化之間的關(guān)系。
　　方法：
　　(1)分組及處理：實驗共分8組。體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞系SRA01/04，在培養(yǎng)液中分別加入濃度為1nM,10nM,100nM,1μM,10μM,100μM和1mM的過氫并處理40min，對照組無過氧化氫，隨后換至正常培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，分別于不同時間點觀察各項指標(biāo)的變化；
　　(2)不同濃度的過氧化氫對人晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響:按照上述方法處理后，分別于在0、6、1

4、2和24h用MTT方法檢測晶狀體上皮細(xì)胞的增生活力,在6h用Western blot觀察不同濃度過氧化氫對晶狀體上皮細(xì)胞表達(dá)PCNA的影響；
　　(3)不同濃度的過氧化氫對人晶狀體上皮細(xì)胞表達(dá)VEGF的影響:按照上述方法處理后，于24h用ELISA方法檢測培養(yǎng)液上清中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的含量。
　　結(jié)果：
　　(1)不同濃度的過氧化氫對人晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響：MTT結(jié)果提示：在培養(yǎng)液中加入1nM～10μM

5、濃度的H2O2處理組，晶狀體上皮細(xì)胞增生率（OD值）隨濃度較對照組明顯增加，其中以10nM最為明顯；而100μM、1mMH2O2處理組，晶狀體上皮細(xì)胞出現(xiàn)生長抑制。用Western blot檢測PCNA表達(dá)的結(jié)果顯示：1nM～10μMH2O2處理組，晶狀體上皮細(xì)胞PCNA表達(dá)隨濃度較對照組明顯增加，其中以10nM最為明顯；而100μM、1mMH2O2處理組晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)PCNA表達(dá)明顯降低；
　　(2)不同濃度的過氧化氫對人晶狀

6、體上皮細(xì)胞表達(dá)VEGF影響：1ｎM-10μM的過氧化氫刺激后，VEGF水平均高于對照組，且呈濃度依賴性，峰值出現(xiàn)在10ｎM和10μMH2O2處理組。反之，100μM、1mM處理組，VEGF水平與對照組無顯著差異，而且明顯低于10nM組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　(1)低濃度（1nM～10μM）的H2O2可以促進晶狀體上皮細(xì)胞增殖，高濃度的過氧化氫（100μM、1mM）對細(xì)胞具有殺傷作用；
　　(2)低濃度（1n