血紅素加氧酶-1在過氧化氫介導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞氧化應(yīng)激及細胞凋亡中的保護作用.pdf

1、目的:本實驗旨在研究血紅素加氧酶-1(HO-1)在過氧化氫(H2O2)介導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞（hLEC;SRA01/04細胞系）氧化應(yīng)激損傷及細胞凋亡中的保護性作用。
　　方法:hLEC分別在H2O2濃度梯度、HO-1誘導(dǎo)劑:鈷原卟啉(CoPP)、鋅原卟啉(ZnPP)濃度梯度的培養(yǎng)基內(nèi)進行培養(yǎng)。同時，基因沉默技術(shù)成功降低HO-1在細胞內(nèi)表達并用于本實驗。細胞存活率使用CCK-8法進行觀察。細胞內(nèi)HO-1的表達水平利用蛋白質(zhì)印跡(W

2、estern blot)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進行檢測。本實驗中，人晶狀體上皮細胞在400μM H2O2中預(yù)培養(yǎng)24h建立了氧化應(yīng)激損傷模型，10μM CoPP和10μM ZnPP良好地誘導(dǎo)了HO-1并避免了嚴(yán)重的細胞毒性。免疫熒光雙標(biāo)法用于細胞鑒定及HO-1胞內(nèi)表達的測定。DCFH-DA熒光探針用于檢測細胞內(nèi)的活性氧(ROS)水平。谷胱甘肽(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)水平檢測使用微孔法商業(yè)檢測試劑盒進行。Annexi

3、n V-FITC/PI染色用于量化不同處理組人晶狀體上皮細胞細胞凋亡率，含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶家族-3、-8(Caspase-3、-8)使用蛋白質(zhì)印跡進行檢測。
　　結(jié)果:1、HO-1顯著地降低ROS水平和增加GSH及SOD活性，從而明顯地減輕了H2O2介導(dǎo)的hLEC氧化應(yīng)激損傷。2、HO-1抑制H2O2介導(dǎo)的促進凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8，因此顯著地降低了hLEC的凋亡率。3、RNA干擾驗證了HO-1