骨髓瘤細(xì)胞Dkk-1mRNA表達(dá)及對成骨細(xì)胞的影響.pdf

1、[目的]:檢測骨髓瘤細(xì)胞株8226和骨肉瘤細(xì)胞株MG63細(xì)胞株培養(yǎng)上清液中Dkk-1的mRNA表達(dá)，持續(xù)觀察兩種上清液對成骨細(xì)胞增殖和ALP表達(dá)水平的影響及拮抗蛋白Dkk-1對成骨細(xì)胞的影響和在多發(fā)性骨髓瘤中的作用。 [方法]: 1.RT-PCR測定骨髓瘤細(xì)胞株8226和骨肉瘤細(xì)胞株MG63中Dkk-1mRNA的表達(dá)情況。 2.人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226和骨肉瘤株MG63置于培養(yǎng)瓶中，MEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)2天后

2、換液，1800rpm離心，上清液用0.22μm微孔濾膜過濾除細(xì)胞碎片，置于-70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?3.MG63上清液和Dkk-1抗體加入鼠胚成骨細(xì)胞M3T3-El培養(yǎng)體系中，采用CASY，CCK-8，ALP染色，ALP水平檢測M3T3-El細(xì)胞的變化。 4.8226上清液和Dkk-1抗體加入鼠胚成骨細(xì)胞3T3-El培養(yǎng)體系中，采用CASY，CCK-8，ALP染色，ALP水平檢測M3T3-El細(xì)胞的變化。 [結(jié)

3、果]:Rt-PCR檢測人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226和骨肉瘤株MG63表達(dá)Dkk-1，但2種細(xì)胞表達(dá)程度不同；人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226和骨肉瘤株MG63培養(yǎng)上清液能夠明顯抑制MC3T3E1細(xì)胞，抑制程度和上清液濃度呈正相關(guān)性，10％，20％，30％MG63上清液加入MC3T3E1細(xì)胞培養(yǎng)液中，CASY計數(shù)分別為5.2±0.5X106(P＜0.01)，4.2±0.6X106(P＜0.01)，3.9±0.7X105(P＜0.01)，而正常

4、培養(yǎng)液組為6.1±0.8x105；加入DKK-1抗體后能夠部分拮抗骨肉瘤株MG63培養(yǎng)上清液對成骨細(xì)胞的抑制，CASY計數(shù)分別為2.1±0.4X105，2.8±0.7X105(P＜0.01)；但是不影響人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226培養(yǎng)上清液對成骨細(xì)胞的抑制，CASY計數(shù)分別為2.9±0.9X105，3.0±0.7X105(P＞0.05)。 堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志，MC3T3E1細(xì)胞處于成骨細(xì)胞的早期階段，堿性磷酸酶表

5、達(dá)水平較低，在50ng/ml濃度的BMP-2(骨形成蛋白)誘導(dǎo)作用下，MC3T3E1細(xì)胞ALP表達(dá)增高，ALP染色強(qiáng)陽性。20％骨肉瘤株MG63和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226培養(yǎng)上清液能夠明顯抑制MC3T3E1細(xì)胞ALP水平，堿性磷酸酶試劑盒檢測為4.53±0.4U/100ml(P＜0.01)，5.85±0.6U/100ml(P＜0.01)，正常組為7.23±1.0U/100ml；加入DKK-1抗體后能夠部分拮抗骨肉瘤株MG63培養(yǎng)上清