PPARγ2內(nèi)源性配體對(duì)成骨細(xì)胞及骨髓細(xì)胞骨代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、骨組織代謝活躍，通過破骨細(xì)胞吸收舊骨和成骨細(xì)胞形成新骨這兩個(gè)既相互偶聯(lián)又相互制約的骨轉(zhuǎn)換過程，不斷進(jìn)行骨重建以對(duì)自身進(jìn)行新陳代謝。增齡時(shí)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞發(fā)生數(shù)量與功能的改變，從而打破骨平衡狀態(tài)，導(dǎo)致增齡相關(guān)的骨量減少及骨質(zhì)疏松癥?，F(xiàn)已明確成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞均來源于骨髓細(xì)胞，隨增齡骨髓細(xì)胞成骨分化可塑性下降，向脂肪細(xì)胞分化潛能增加，此過程與調(diào)節(jié)脂肪分化的PPARγ2基因表達(dá)增加有關(guān)，提示此基因可能直接參與了骨代謝過程。高表達(dá)P

2、PARγ2的原因推測(cè)與增齡使其內(nèi)源配體產(chǎn)生增加和其它轉(zhuǎn)錄因子對(duì)其抑制作用減弱有關(guān)。隨增齡機(jī)體內(nèi)許多PPARγ2天然配體水平增高，如多不飽和脂肪酸、氧化低密度脂蛋白等，它們是否參與了增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生，目前相關(guān)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)擬觀察不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、亞油酸、LTB4干預(yù)后，成骨細(xì)胞及骨髓細(xì)胞PPARγ2及骨代謝相關(guān)基因RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表達(dá)水平的變化，為進(jìn)一步探討增齡相關(guān)

3、的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生機(jī)制提供新思路。
　　 一、PPARγ2內(nèi)源性配體對(duì)成骨細(xì)胞骨代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　 目的：觀察不同濃度PPARγ2內(nèi)源性配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共軛亞油酸(c9,t11-CLA和 t10,c12-CLA)干預(yù)后，大鼠成骨細(xì)胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG mRNA表達(dá)水平的變化，探討以上四種PPARγ2內(nèi)源性配體對(duì)骨代謝的影響。
　　 方法：在體外培養(yǎng)的

4、大鼠成骨細(xì)胞中分別加入不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干預(yù)24小時(shí)，采用半定量RT-PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表達(dá)水平，分別比較上述四種PPARγ2內(nèi)源性活化配體對(duì)骨代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 （1）不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈劑量依賴性下調(diào)成骨細(xì)胞RANKL、ALP、OPG

5、mRNA的表達(dá)水平，同時(shí)呈劑量依賴性上調(diào)PPARγ2 mRNA的表達(dá)水平，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；
　　 （2）不同濃度c9,t11-CLA呈劑量依賴性上調(diào)成骨細(xì)胞RANKL和OPG mRNA的表達(dá)水平，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，且呈非劑量依賴性上調(diào) ALP mRNA的表達(dá)，但干預(yù)組PPARγ2 mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同濃

6、度t10,c12-CLA呈劑量依賴性上調(diào)成骨細(xì)胞RANKL和OPG mRNA的表達(dá)水平，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；且呈非劑量依賴性上調(diào) ALP mRNA的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)PPARγ2 mRNA的表達(dá)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性抑制成骨細(xì)胞成骨標(biāo)記物基因的表達(dá)

7、，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病過程，而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通過促進(jìn)成骨基因表達(dá)有利于骨形成，在骨代謝中發(fā)揮正調(diào)控作用。
　　 二、PPARγ2內(nèi)源性配體對(duì)大鼠骨髓細(xì)胞骨代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　 目的：因骨髓細(xì)胞中含有成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，故觀察不同濃度PPARγ2內(nèi)源性配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4以及共軛亞油酸(c9,t11-CLA和 t10,c12-CLA)

8、干預(yù)后，大鼠骨髓細(xì)胞PPARγ2及RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表達(dá)水平的變化，探討以上四種PPARγ2內(nèi)源性活化配體在骨代謝中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠骨髓細(xì)胞，分別加入不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4、c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干預(yù)24小時(shí)，采用半定量RT-PCR檢測(cè)骨髓細(xì)胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK及TRAP mRNA表達(dá)水平，分別

9、比較上述四種PPARγ2內(nèi)源性配體對(duì)骨代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 （1）不同濃度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈劑量依賴性下調(diào)骨髓細(xì)胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表達(dá)水平，同時(shí)呈劑量依賴性上調(diào)PPARγ2、 RANK、TRAP mRNA的表達(dá)水平，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；
　　 （2）不同濃度c9,t11-CLA呈劑量依賴性下調(diào)骨髓細(xì)

10、胞RANK、TRAP mRNA的表達(dá)水平，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，但干預(yù)組RANKL、ALP、OPG及PPARγ2 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同濃度t10,c12-CLA呈劑量依賴性上調(diào)骨髓細(xì)胞RANKL、OPG mRNA的表達(dá)水平，同時(shí)呈劑量依賴性下調(diào)RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表達(dá)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，但干預(yù)組

11、ALP mRNA的表達(dá)與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性抑制骨髓細(xì)胞成骨標(biāo)記物基因的表達(dá)，促進(jìn)破骨細(xì)胞標(biāo)記物基因的表達(dá)，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松的發(fā)病過程，而c9,t11-CLA及t10,c12-CLA可能通過促進(jìn)骨髓細(xì)胞成骨基因表達(dá)或抑制破骨細(xì)胞基因表達(dá)而促進(jìn)骨形成，在骨代謝中發(fā)揮正調(diào)控作用。

12、　　 結(jié)論：
　　 1PPARγ2內(nèi)源性活化配體Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通過激活PPARγ2轉(zhuǎn)錄活性下調(diào)成骨細(xì)胞RANKL、OPG、ALP mRNA表達(dá)，上調(diào) PPARγ2表達(dá)，抑制成骨過程；同時(shí)內(nèi)源性配體激活PPARγ2可下調(diào)骨髓細(xì)胞RANKL、OPG、ALP mRNA的表達(dá)，上調(diào)其RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表達(dá)，通過抑制成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)破骨細(xì)胞分化，從而參與增齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松的發(fā)病過